Título:	Prospecção e caracterização de peptídeos nematicidas em sementes de Moringa oleifera para o controle de endoparasitoses em pequenos ruminantes.
Autoria:	SOUSA, A. M. P.
Afiliação:	ANA MÁRJORY PAIVA SOUSA.
Ano de publicação:	2020
Referência:	2020.
Páginas:	127 f.
Conteúdo:	Resumo: Propriedades anti-helmínticas das sementes de Moringa oleifera(moringa) têm sido descritas contra diferentes nematoides gastrintestinais (GI), particularmente sobre Haemonchus contortus. Contudo, estudos acerca da identidade dos compostos ativos, bem como, abordagens visando o uso da moringa para o controle alternativo de helmintoses são bastante limitadas. Assim, o objetivo do presente estudo foi prospectar e caracterizar peptídeos nematicidas em sementes de M. oleiferae avaliar o uso dessas sementes no controle de endoparasitoses em pequenos ruminantes. As etapas de purificação e identificação de compostos ativos foram bioguiadas por testes de eclosão de ovos in vitro, além de ensaios de microfloculação. Extrato aquoso proteico das sementes de moringa foi fracionado através de ultrafiltração em membranas (MWCO 12 e 2 kDa), sendo os peptídeos separados e identificados utilizando técnicas de cromatografia emfase reversa e espectrometria de massa. Para avaliaçãodassementesem estratégias de controle parasitário, farelo (F-Mo) e torta (T-Mo) de moringa (coprodutos)foram produzidos através de prévia delipidação das sementes com hexanoeporprensagem, respectivamente. Em estudo in vivo, os efeitos fitoterápicos do F-Moe de seu extrato aquoso (EAF-Mo) foram avaliados sobre ovinos da raça Santa Inês (n = 36) infectados artificialmente com nematoides GI e mantidos sob dieta de alto concentrado. Utilizando delineamento inteiramente casualizado, os animais foram distribuídos randomicamente em quatro grupos, cada animal recebeu, por via oral, duas doses de Oxfendazol 2,5 mg/Kg (G1); F-Mo 250 mg/Kg (G2); EAF-Mo 250 mg/Kg (G3) e Água -Grupo não tratado (G4). Coletas de sangue e fezes foram realizadas durante 8 semanas de avaliação, sendo os tratamentos administrados nas semanas 0 e 4. Finalmente, usando experimento em casa de vegetação, avaliou-se os efeitos da aplicação de T-Mo no solo em relação à contaminação de forragem por larvas de nematoides.Os resultados deste estudo demonstraram, de forma inédita, a identificação de quatro peptídeos nematicidas a partir das sementes de moringa, denominados de Mo-HLPs 1-4. Multifuncionais, os Mo-HLPs também se mostraram eficientes em reduzir turbidez de água e foram descritos como novosagentes floculantes da espécie. As análises proteômicas revelaram que Mo-HLPs são moléculas básicas (pI > 10), ricas em cisteínas, com massas entre 4,5 e 4,8 kDa, e com um domínio de ligação à quitina altamente conservado. Buscas no BLAST mostraram que Mo-HLPs pertencem à família de peptídeos hevein-like e apresentam 90% de identidade com morintides de folhas de M. oleifera. In vitro, Mo-HLPs exibirameficiências distintas entre as isoformas, onde atividades inibitórias da eclosão de ovos variaram de73%a100% enquanto os efeitos floculantes registradosforam entre67%e89%. In vivo, frente a excelentes condições nutricionais, não foi possível observar diferenças clínicas, parasitológicos ou hematológicas entre grupos tratados e não tratado com moringa (P > 0,05). A porcentagem média de redução da contagem de ovos nas fezes ao final do estudo foi de 88%, 68%, 52% e 74% para G1, G2, G3 e G4, respectivamente. Valores de volume globular e proteínas plasmáticas totais mantiveram-se dentro da normalidade. No experimento em casa de vegetação, a adição de doses crescentes de T-Mo (0, 12.5, 25 e 50 g) sobre o solo de vasos contendo fezes contaminadas mostrou uma tendência de redução nos níveis de infestação de capim-tanzânia por larvas de nematoides. Tal ação nematicida foi acompanhada de aumentos nos índices relativos de clorofila das plantas. Em conclusão, os peptídeos isolados de moringa (Mo-HLPs) representam um novo grupo de agentes nematicidas com potencial para o desenvolvimento de novas drogas anti-helmínticas; o farelo e a torta das sementes apresentam efeitos nematicidas contra estágios de formas de vida livre de nematoides gastrintestinais e podem ser exploradas como opções interessantes para comporem sistemas integrados de controle parasitário, contribuindo para a sustentabilidade dos processos produtivos. Abstract: Anthelmintic properties of Moringa oleifera(moringa) seeds have been described against gastrointestinal (GI)nematodes, particularly on Haemonchus contortus.However, studies on the identity of the active compounds, as well as on approaches aimed at the use of moringa forthe alternative control of helminth infectionsare quite limited. Thus, the aim of the present study was to prospect and characterize nematicidal peptides in M. oleiferaseeds and to evaluate the use of these seeds in the control of endoparasites in smallruminants.The stages of purification and identification of active compounds were bioguided by in vitroegg hatching assay, in addition to microflocculation tests.Aqueous protein extract of the moringa seeds was fractionated through membrane ultrafiltration (MWCO 12 and 2 kDa), and the peptides separated and identified using reverse phase chromatography and mass spectrometry techniques.To evaluate the seeds in parasite control strategies, moringa bran (F-Mo) and moringa cake (T-Mo) (coproducts) were produced through previous delipidation of the seeds with hexane and by pressing, respectively.For the in vivo study, the phytotherapeutic effects of F-Mo and its aqueous extract (EAF-Mo) were evaluated on Santa Inês sheep (n = 36) artificially infected with GInematodes and kept under a high concentrate diet.Using a completely randomized design, the animals were randomly distributed into four groups, each animal received, orally, two doses of Oxafendazole 2.5 mg/Kg (G1); F-Mo 250 mg/Kg (G2); EAF-Mo 250 mg Kg (G3) and Water -untreated group (G4).Blood and fecal collections were performed during 8 weeks of evaluation, with treatments administered at weeks 0 and 4.Finally, using a greenhouse experiment, the effects of applying T-Mo to the soil in relation to forage contamination by nematode larvae were evaluated.The results of this study demonstrated, in an unprecedented way, the identification of four nematicidal peptides from the moringa seeds, called Mo-HLPs 1-4. Multifunctional, Mo-HLPs showed ability to effectively remove turbidity of water and were described as new flocculating agents of the species.Proteomic analyzes revealed that Mo-HLPs are basic molecules (pI> 10), rich in cysteines, with masses between 4.5 and 4.8 kDa, and with a highly conserved chitin-binding domain.Searches in BLAST showed that Mo-HLPs belong to the family of hevein-like peptides and have 90% identity with morintides of M. oleiferaleaves.In vitro, Mo-HLPs exhibited distinct efficiencies between isoforms, where percent egg hatchinhibition values ranging from 73%to 100% while the flocculating effects recorded were from 67%to 89%.In vivo, due to excellent nutritional conditions, it was not possible to observe clinical, parasitological or hematological differences between groupstreated and not treated with moringa (P> 0.05).The reduction percentage of the fecal egg count was was 88%, 68%, 52% and 74% for G1, G2, G3 and G4, respectively. Globular volume values and total plasma proteins remained within the normal range. In the greenhouse experiment, the addition of increasing doses of T-Mo (0, 12.5, 25 and 50 g) on the soil of vase containing contaminated feces, there was a tendency to reduce the levels of tanzânia grass infestation by nematode larvae. Such nematicidal action was accompanied by increases in the relative chlorophyll index of plants. In conclusion, the peptides isolated from moringa (Mo-HLPs) represent a new group of nematicidal agents with the potential for the development of new anthelmintic drugs; the bran and the seed cake have nematicidal effects against stages of life forms free of gastrointestinal nematodes and can be explored as interesting options to compose integrated systems of parasitic control, contributing to the sustainability of the production processes.
Thesagro:	Caprino Ovino Moringa Oleifera Peptídeo Nematicida Helminto Gastrintestinal Controle Integrado Haemonchus Contortus Anti-Helmíntico
NAL Thesaurus:	Small ruminants Goats Sheep Peptides Nematicides Nematode control Helminths
Palavras-chave:	Helmintose Endoparasitose Pequenos ruminantes Plant nematode Integrated control
Notas:	Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Universidade Estadual do Ceará, Rede Nordeste de Biotecnologia, Fortaleza. Orientação: Antônio Sílvio do Egito (CNPC); Coorientação: Hévila Oliveira Salles (CNPC).
Tipo do material:	Teses
Acesso:	openAccess
Aparece nas coleções:	Tese/dissertação (CNPC)