Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária

Embrapa Pantanal

Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento

Ultrassonografia na reprodução
e avaliação de carcaças em bovinos

Ériklis Nogueira

Juliana Corrêa Borges Silva

Alessandra C. Nicacio

Gisele Zoccal Mingoti

Editores Técnicos

Embrapa

Brasília, DF

2021

Embrapa Pantanal

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Embrapa Pantanal

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Coordenação editorial: Alexandre de Oliveira Barcellos, Heloiza Dias da Silva, Nilda Maria da Cunha Sette

Supervisão editorial: Juliana Meireles Fortaleza

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Normalização bibliográfica: Rejane Maria de Oliveira

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Editoração eletrônica do e-book: Paula Cristina Rodrigues Franco

Revisão do e-book: Maria Cristina Ramos Jubé

1ª edição

1ª impressão (2017): 1.000 exemplares

E-book (2021)

Todos os direitos reservados

A reprodução não autorizada desta publicação, no todo ou em parte, constitui violação dos direitos autorais (Lei nº 9.610).

Dados Internacionais de Catalogação na Publicação (CIP)

Embrapa

Ultrassonografia na reprodução e avaliação de carcaças em bovinos / Ériklis Nogueira ... [et al.], editores técnicos. – Brasília, DF : Embrapa, 2021.

E-book : il. color.

E-book, no formato ePub, convertido do livro impresso.

ISBN 978-65-86056-39-6

1. Reprodução animal. 2. Gado de corte. 3. Métodos analíticos. 4. Técnicas de diagnóstico. I. Nogueira, Ériklis. II. Silva, Juliana Corrêa Borges. III. Nicacio, Alessandra C. IV. Mingoti, Gisele Zoccal. V. Embrapa Pantanal.

CDD 635.21 

Rejane Maria de Oliveira (CRB-1/2913)

© Embrapa, 2021

Autores

Alessandra Corallo Nicacio

Médica-veterinária, doutora em Reprodução Animal, pesquisadora da Embrapa Gado de Corte, Campo Grande, MS

Alvaro Augusto Anunziato Dock Fortunato

Médico-veterinário, membro do Grupo de Estudos e Pesquisas em Reprodução Animal/CNPq (Gera-MS), Campo Grande, MS

Bruno Xavier Ferreira

Médico-veterinário, mestre em Ciência Animal, membro do Grupo de Estudos e Pesquisas em Reprodução Animal/CNPq (Gera-MS), Campo Grande, MS

Carlos Antônio Carvalho Fernandes

Médico-veterinário, doutor em Reprodução, Sanidade e Bem-Estar Animal, diretor técnico da Biotran, Alfenas, MG

Carmem Estefânia Serra Neto Zúccari

Médica-veterinária, doutora em Medicina Veterinária, professora da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul (UFMS), Campo Grande, MS

Cynthia Cantagessi de Souza

Médica-veterinária, mestranda em Ciência Animal pela Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Campo Grande, MS

Christopher Junior Tavares Cardoso

Zootecnista, mestre em Produção Animal, doutorando em Ciências Veterinárias pela Universidade Federal de Mato Grosso do Sul (UFMS), Campo Grande, MS

Eduardo Kenji Nunes Arashiro

Médico-veterinário, doutor em Ciência Animal, professor da Universidade Federal Fluminense (UFF), Niterói, RJ

Eliane Vianna da Costa e Silva

Médica-veterinária, doutora em Zootecnia, professora da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul (UFMS) e coordenadora do Grupo de Estudos e Pesquisas em Reprodução Animal/CNPq (Gera-MS), Campo Grande, MS

Ériklis Nogueira

Médico-veterinário, doutor em Reprodução Animal, pesquisador da Embrapa Pantanal, Corumbá, MS

Evelyn Rabelo Andrade

Médica-veterinária, doutora em Ciências Veterinárias, professora da Universidade Federal de Rondônia (Unir), Rolim de Moura, RO

Fabiana Andrade Melo Sterza

Médica-veterinária, doutora em Ciências Veterinárias, professora da Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul (UEMS), Aquidauana, MS

Gelson Luis Dias Feijó

Médico-veterinário, doutor em Criação de Animais e Genética, pesquisador da Embrapa Gado de Corte, Campo Grande, MS

Gisele Zoccal Mingoti

Médica-veterinária, doutora em Fisiologia, professora da Universidade Estadual Paulista “Júlio de Mesquita Filho” (Unesp), campus de Araçatuba, SP

Heitor Romero Marques Júnior

Médico-veterinário, doutor em Medicina Veterinária Preventiva, professor da Universidade Católica Dom Bosco (UCDB), Campo Grande, MS

João Henrique Moreira Viana

Médico-veterinário, doutor em Ciência Animal, pesquisador da Embrapa Gado de Leite, Juiz de Fora, MG

Juliana Corrêa Borges Silva

Médica-veterinária, doutora em Reprodução Animal, pesquisadora da Embrapa Pantanal, Corumbá, MS

Luiz Carlos Cesar Costa Filho

Médico-veterinário, doutor em Ciência Animal, membro do Grupo de Estudos e Pesquisas em Reprodução Animal/CNPq (Gera-MS), Campo Grande, MS

Luiz Francisco Machado Pfeifer

Médico-veterinário, doutor em Melhoramento e Reprodução Animal, pesquisador da Embrapa Rondônia, Porto Velho, RO

Luiz Gustavo Bruno Siqueira

Médico-veterinário, doutor em Biologia Molecular e Celular Animal, pesquisador da Embrapa Gado de Leite, Juiz de Fora, MG

Mariane Gabriela Cesar Ribeiro Ferreira

Zootecnista, mestranda em Zootecnia pela Universidade Estadual de Mato Grosso do Sul (UEMS), Aquidauana, MS

Marina de Nadai Bonin

Zootecnista, doutora em Zootecnia, professora da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul (UFMS), Campo Grande, MS

Miller Pereira Palhão

Médico-veterinário, doutor em Fisiologia da Reprodução Animal, professor da Universidade José do Rosário Vellano (Unifenas), Alfenas, MG

Rodrigo da Costa Gomes

Zootecnista, doutor em Qualidade e Produtividade Animal, pesquisador da Embrapa Gado de Corte, Campo Grande, MS

Vanessa Lopes Dias Queiroz

Médica-veterinária, mestre em Ciência Animal, doutoranda em Medicina Veterinária pela Universidade Federal de Viçosa (UFV), Viçosa, MG

Vitor Mioto Oliveira

Médico-veterinário, membro do Grupo de Estudos e Pesquisas em Reprodução Animal/CNPq (Gera-MS), Campo Grande, MS

Walvonvitis Baes Rodrigues

Médico-veterinário, doutor em Zootecnia, bolsista DCR Fundect/Embrapa Pantanal, Corumbá, MS

Agradecimentos

Aos proprietários de fazendas que permitiram a realização de exames e a utilização das imagens geradas.

Aos médicos-veterinários Neimar Corrêa Severo, pelas ilustrações dos Capítulos 2 e 3, e Leonardo Sirena, pela colaboração nas imagens do Capítulo 4.

Aos médicos-veterinários Ailson S. da Silva e José Maurício de Araújo, por cederem as imagens de ultrassom obtidas em suas rotinas práticas.

Ao grupo Repronutri, pelo apoio nas revisões e na elaboração deste livro.

Apresentação

Foi muito oportuna a escolha desta pesquisa para a moderna pecuária brasileira, tendo em vista, principalmente, a escassez de informações sobre o tema na literatura especializada. O uso da ultrassonografia na reprodução e na avaliação de carcaças de bovinos apresenta uma série de vantagens: é um procedimento seguro, de alta acurácia e economia, que oferece um diagnóstico rápido e confiável.

Em seis capítulos, que abordam desde conceitos anatômicos e fisiológicos dos animais até aplicações práticas dessa tecnologia, comprova-se a eficiência da ultrassonografia como ferramenta de gestão e de altos resultados no campo.

A linguagem técnica, porém sem excessos, que os autores imprimiram à obra não é empecilho para a compreensão de um conteúdo atualizado e rico em imagens, que será de muita valia para quem usa a ultrassonografia como ferramenta de trabalho.

O livro traz, ainda, dados inéditos de pesquisas recentes sobre o tema, contribuindo, dessa forma, para o crescimento dessa área de estudo e a demonstração desse caso de sucesso, que é a pecuária de corte no Brasil.

Jorge Antonio Ferreira de Lara

Chefe-Geral da Embrapa Pantanal

Prefácio

Há décadas que o segmento da pecuária vem se destacando como um dos pilares do agronegócio brasileiro. Mesmo enfrentando obstáculos, o rebanho bovino nacional estrutura-se de maneira robusta, acumulando experiências ano após ano, principalmente na área da tecnologia.

Esta obra, concebida graças a uma feliz parceria editorial entre a Embrapa e a Universidade Estadual Paulista (Unesp-Araçatuba), contém relevantes informações acerca do emprego da ultrassonografia em bovinos, aplicada na reprodução de bovinos e na avaliação de carcaças. O livro é dotado de diferenciais que o destacam entre os presentes no mercado. Foi feita uma cuidadosa abordagem da anatomia e da fisiologia animal. Em seguida, foi demonstrada a aplicabilidade do ultrassom no contexto reprodutivo e na avaliação de carcaça, tema pouco explorado e de divulgação bem restrita na literatura especializada. Por isso, tema bastante caro à comunidade científica. Complementarmente, muitos recursos tecnológicos foram investigados, como o emprego do Doppler, de imagens 3D e 4D e a análise computacional de imagens. Ademais, foram conciliadas informações as mais variadas, provenientes dos diversos estados do Brasil.

Mais de 25 pesquisadores participaram da produção desta pesquisa, todos eles com sólida experiência nos respectivos campos do conhecimento, unidos no mesmo interesse de aprimorar a eficiência da pecuária no Brasil. Esta obra certamente ajudará a capacitar o profissional interessado em aumentar seus conhecimentos nessa nova e tão promissora área, que é a da ultrassonografia aplicada ao bovino.

Boa leitura!

Marcelo Marcondes Seneda

Professor da Universidade Estadual de Londrina e presidente da Sociedade Brasileira de Tecnologia de Embriões

Introdução

O uso da ultrassonografia em reprodução e avaliação de carcaças de bovinos é prática consolidada, sendo essa técnica aplicada tanto para fins científicos quanto para aumentar a eficiência do manejo rotineiro desses animais nas propriedades. Sua eficácia se deve ao fato de permitir a visualização, em tempo real, das estruturas a serem analisadas. Além disso, é um método não invasivo, que possibilita diagnósticos precoces, rápidos e com grande acurácia.

Para que a ultrassonografia seja um método de diagnóstico eficiente, é preciso que o profissional tenha farto conhecimento tanto sobre as funções do equipamento quanto sobre os elementos anatômicos e fisiológicos dos animais avaliados pela técnica.

Este livro aborda aspectos relacionados com a morfologia e a fisiologia reprodutiva dos bovinos, como: controle endócrino, dinâmica folicular, condições patológicas de útero e ovário, diagnóstico precoce de gestação, sexagem fetal, exame ginecológico e aspiração folicular, bem como a utilização de ultrassonografia como ferramenta auxiliar nas avaliações do trato reprodutor de touros. Relata também uma experiência nova, com o emprego do Doppler na reprodução de bovinos, e inovações em relação à ultrassonografia, que poderão ser utilizadas em breve na rotina diagnóstica. Ademais, um dos capítulos trata da utilização dessa ferramenta na avaliação de carcaças bovinas.

As imagens apresentadas – obtidas das rotinas práticas e/ou de pesquisas dos autores – poderão servir de fonte de consulta a técnicos e estudantes, capacitando-os, assim, a aplicar corretamente a técnica da ultrassonografia na reprodução e na avaliação de carcaça bovina.

Capítulo 1
Anatomofisiologia do ciclo estral de fêmeas bovinas

Fabiana Andrade Melo-Sterza

Evelyn Rabelo Andrade

Mariane Gabriela Cesar Ribeiro Ferreira

Ériklis Nogueira

Christopher Junior Tavares Cardoso

O objetivo deste capítulo é revisar os conhecimentos sobre a dinâmica de crescimento e desenvolvimento dos folículos ovarianos, e relacioná-los com a ultrassonografia. O que se conhece hoje sobre dinâmica folicular é devido, em grande parte, a essa técnica. A primeira hipótese de que o ciclo estral ocorresse em um padrão de ondas foliculares foi levantada por Rajakoski (1960), ao fazer análises histológicas do tecido ovariano. No entanto, os maiores avanços sobre o conhecimento da fisiologia da reprodução de fêmeas bovinas foram registrados no final da década de 1980, quando a ultrassonografia e os exames laboratoriais de maior eficácia começaram a ser empregados (ADAMS et al., 1992; GINTHER et al., 1989a).

Esses conhecimentos foram fundamentais para o desenvolvimento e o aperfeiçoamento de biotécnicas da reprodução assistida, como a sincronização do estro para a realização da inseminação artificial em tempo fixo (IATF) e a transferência de embriões em tempo fixo (TETF), a superovulação de doadoras de embriões e o controle do ciclo estral de doadoras de oócitos. Apesar dos grandes avanços obtidos, algumas questões relacionadas à dinâmica folicular ainda não foram esclarecidas, o que vem motivando o interesse de diversos pesquisadores (CARVALHO et al., 2008; CUMMINS et al., 2012; ENDO et al., 2012), interessados em melhorar, cada vez mais, a eficiência reprodutiva dos rebanhos bovinos.

Diferenciação sexual

O sexo cromossômico do animal é determinado no momento da fecundação. Cada oócito carrega um cromossomo sexual X, enquanto o espermatozoide pode carregar um cromossomo sexual X ou Y. A formação de embriões do sexo feminino se dará quando o oócito for fecundado por espermatozoide que carrear um cromossomo X (fêmeas normais são constituídas por dois cromossomos do tipo X: XX), enquanto embriões do sexo masculino serão formados após a fecundação do oócito por espermatozoide carreador de cromossomo do tipo Y (XY). No entanto, no início do desenvolvimento embrionário, todos os embriões são fenotipicamente iguais, ou seja, ainda não sofreram diferenciação sexual.

Depois de completado o estímulo para a diferenciação sexual, inicia-se uma cascata de acontecimentos que promove alterações na regulação gênica e nas interações moleculares diferenciais de embriões XX ou XY. Esse estímulo envolve a secreção testicular de dois hormônios principais: o hormônio antimülleriano (AMH) e a testosterona, os quais inibem o desenvolvimento de características femininas e promovem a diferenciação das características masculinas (SWAIN; LOVELL-BADGE, 1999).

Em bovinos, o início da migração dos órgãos sexuais ocorre aproximadamente aos 48 dias de gestação. Nessa fase, são denominados de “tubérculos genitais”. A partir do 48º dia, tem início a migração do tubérculo genital em direção ao umbigo, nos machos, e à cauda, nas fêmeas, originando o pênis e o clitóris, respectivamente (CURRAN et al., 1989; VIGIER et al., 1976). O tubérculo genital para a identificação do sexo fetal é observado, por ultrassonografia, em sua posição definitiva aos 56 dias nos machos e aos 53 dias nas fêmeas (BARROS; VISINTIN, 2001). No Capítulo 2, serão apresentadas imagens ultrassonográficas de fetos machos e fêmeas.

Anatomia e fisiologia do aparelho genital feminino

O aparelho genital feminino dos bovinos é formado por ovários, tubas uterinas ou ovidutos, útero, vagina e vulva (Figura 1).

Figura 1. Aparelho genital da vaca em vista dorsal, em que o corno uterino direito, a vagina e a vulva estão abertos.

Fonte: Sisson e Grossman (1986).

Ovários

Os ovários são responsáveis pela secreção de hormônios esteroides sexuais e de outros hormônios/fatores locais que exercem o controle endócrino das funções reprodutivas, e também pela gametogênese (produção de oócitos). São estruturas pares, localizadas na cavidade pélvica (animais jovens) ou abdominal (fêmeas multíparas). Apresentam forma ovoide, ligeiramente achatada, que varia conforme a fase do ciclo estral. Em média, cada ovário bovino mede de 3,5 cm x 2,5 cm e seu peso varia de 15 g a 20 g. Os ovários ficam presos à parede dorsal do abdômen pelo mesovário, uma parte do ligamento largo.

Histologicamente, os ovários possuem duas regiões: a cortical e a medular. A medula ovariana é localizada na porção mais interna do ovário (com exceção dos equídeos) e consiste do arranjo irregular de tecido conjuntivo e extenso sistema nervoso e vascular. A região cortical contém folículos ovarianos, em vários estádios de desenvolvimento, e corpos lúteos. O hilo ovariano é o local de entrada e saída de vasos sanguíneos.

O folículo é a unidade morfofuncional do ovário, sendo constituído por um oócito circundado por células somáticas (células da granulosa e tecais). De acordo com o grau de desenvolvimento, os folículos podem ser divididos em: a) folículos pré-antrais ou não cavitários; e b) folículos antrais ou cavitários. Os folículos ovarianos pré-antrais armazenam a grande maioria dos oócitos presentes no ovário. Entretanto, 99% deles não chegam à ovulação, sendo eliminada por um processo conhecido por “atresia folicular”. Estima-se a existência de uma população de 143.929 folículos pré-antrais em fetos Bos indicus e de 285.155 em fetos Bos taurus, os quais são reduzidos para uma população de 70 mil a 80 mil folículos pré-antrais em fêmeas de aproximadamente 12 meses de idade (SILVA-SANTOS et al., 2011). Folículos pré-antrais não são visualizados por ultrassonografia.

Depois da ovulação, ou seja, depois da liberação do oócito pelo folículo, com a consequente perda do líquido folicular, forma-se uma glândula endócrina transitória, denominada “corpo lúteo” (CL). Imediatamente antes da ovulação, a membrana basal desintegra-se entre as células da granulosa e da teca interna, eliminando a barreira física existente entre elas. Com a ruptura do folículo, rompem-se os vasos sanguíneos do seu interior e é criado um coágulo sanguíneo na cavidade formada após a ovulação. Essa estrutura, que recebe o nome de “corpo hemorrágico”, permanece no ovário até o terceiro dia do ciclo estral. As células da granulosa e da teca interna sofrem luteinização, que culmina com a formação de células esteroidogênicas grandes e pequenas, oriundas, respectivamente, das células da granulosa e da teca interna. Se não houver estabelecimento da prenhez, o corpo lúteo regredirá e formará uma cicatriz, que recebe o nome de corpus albicans.

Ovidutos

Os ovidutos – também denominados de “trompas uterinas”, “trompas de falópio”, “tubas uterinas” e “salpinges” – são divididos anatomicamente em infundíbulo (mais próximo do ovário), ampola (intermediário) e istmo (ligação com o útero). Os ovidutos estão situados entre o útero e os ovários, e são sustentados pela mesossalpinge (porção do ligamento largo que sustenta o oviduto). Seu diâmetro é muito menor que o dos cornos uterinos.

As células epiteliais podem ser ciliadas (auxiliam na movimentação do oócito e são em maior número no infundíbulo) e não ciliadas, ou seja, possuem microvilos, mas têm função secretora, com o objetivo de favorecer a capacitação espermática e a nutrição dos gametas.

Suas principais funções são: a) capturar oócitos liberados pelo ovário (na região do infundíbulo – Figura 1) transportar os espermatozoides e promover um ambiente adequado à fecundação (na região da ampola) e as primeiras divisões celulares; e c) transportar os embriões para o útero.

Útero

As funções do útero são as seguintes: a) transportar os espermatozoides até o ponto de fecundação na trompa; b) proporcionar um ambiente favorável à capacitação espermática; c) fornecer condições nutritivas para o blastocisto, até que se complete a implantação; d) proporcionar nutrição e proteção ao feto; e) participar dos processos mecânicos do parto, por meio da contração do miométrio (camada muscular do útero); e f) produzir hormônios (prostaglandina).

Esse órgão encontra-se quase inteiramente na cavidade abdominal. Suas margens estão unidas à parede pélvica e abdominal pelo ligamento largo. Ele é composto de dois cornos: um corpo relativamente longo e uma cérvix, também chamada de “colo”. Na vaca, os cornos apresentam comprimento médio de 35 cm a 40 cm, e seu diâmetro diminui gradualmente, no sentido do oviduto, permitindo uma união suave com os cornos.

A parede uterina divide-se em três camadas: a mucosa (ou endométrio), que delimita o interior do útero e é altamente glandular; a muscular ou miométrio; e a serosa, ou perimétrio.

Cada um dos cornos uterinos apresenta aproximadamente quatro fileiras com quinze carúnculas, podendo alcançar até cem. As carúnculas são descritas como proeminências ovais. No útero não gravídico, medem cerca de 15 mm de comprimento. Tornam-se de 80 a 100 vezes maiores durante a gestação, chegando a medir de 10 cm a 12 cm de comprimento. A face profunda possui um hilo, no qual penetram os vasos, e o restante da superfície tem uma aparência esponjosa, por conta das criptas, que recebem as vilosidades coriônicas.

O colo ou cérvix faz a conexão entre a vagina e o corpo uterino. Tem as seguintes funções: a) produzir muco cristalino durante o estro e tampão mucoso na gestação; b) proteger o útero contra a penetração de partículas micro- e macroscópicas; e c) participar da seleção dos espermatozoides.

A estrutura da cérvix assemelha-se à de um esfíncter e apresenta aproximadamente 10 cm de comprimento total. Suas paredes são muito densas, sendo que sua espessura pode ultrapassar 3 cm. O conduto cervical é irregular, caracterizado pelo entrelaçamento de projeções superficiais, denominadas “anéis cervicais”. Os anéis cervicais são em número de três a sete, e o último deles projeta-se na vagina. O canal cervical normalmente está fechado e é de difícil dilatação, relaxando-se apenas durante o estro, quando as células caliciformes secretam muco, o qual também sela esse canal no animal prenhe (DYCE et al., 2004). O colo é sustentado pelos ligamentos largos e redondos do útero.

Vagina

A vagina é o órgão copulador do sistema reprodutor da fêmea e também o canal de passagem do feto no momento do parto. Possui paredes grossas e mede, no animal não gestante, de 25 cm a 30 cm de comprimento. Na parede ventral da vagina, entre as túnicas musculares e a mucosa, encontram-se os condutos de Gartner. Suas paredes consistem de uma superfície epitelial, com células estratificadas escamosas, de uma camada muscular e de uma camada serosa.

Genitália externa ou vulva

A genitália externa ou vulva é a porção caudal da genitália feminina, que se estende da vagina para o exterior. É formada pelo clitóris, pelos lábios vulvares e por certas glândulas que se abrem no vestíbulo vaginal (Figura 2). É bem provida de terminações nervosas sensitivas, que possuem importante papel na excitação sexual da fêmea.

Nesse órgão estão localizados os lábios maiores, grossos e enrugados, que apresentam duas comissuras agudas, sendo que a ventral forma um ângulo muito agudo e apresenta pelos grossos. Seu tegumento é ricamente dotado de glândulas sebáceas e tubulares, com depósitos de gordura, de tecido elástico e de uma fina camada de músculo liso. Os lábios menores são constituídos de tecido esponjoso.

Figura 2. Genitália externa ou vulva bovina.

Foto: Fabiana Andrade Melo-Sterza

O clitóris, vestígio feminino correspondente ao pênis, apresenta um corpo de 10 mm a 12 mm de comprimento, e é flexível, sendo recoberto pela comissura ventral do vestíbulo. Essa estrutura é composta de tecido erétil, com terminações nervosas sensoriais.

Endocrinologia da reprodução

As alterações morfofisiológicas que ocorrem no trato reprodutivo da fêmea durante o ciclo estral, incluindo a dinâmica folicular ovariana, são controladas por hormônios hipotalâmicos e hipofisários, além dos produzidos nos ovários e no próprio útero.

Dois hormônios glicoproteicos produzidos pelos gonadotrofos, células da adeno-hipófise, afetam as gônadas: hormônio folículo estimulante (FSH) e hormônio luteinizante (LH). O FSH tem a função de estimular o crescimento dos folículos antrais, enquanto o LH a de estimular a retomada da maturação meiótica do oócito (passagem da prófase I para a metáfase II) e a de estimular a ovulação (rompimento do folículo para liberação do oócito) e a formação do corpo lúteo (luteinização das células da granulosa e da teca do folículo).

Assim como o FSH, o LH exerce ação na gônada feminina (ovário) por meio da ligação em receptores específicos de membrana citoplasmática, razão pela qual ambos os hormônios são denominados de “gonadotrofinas”. As gonadotrofinas são secretadas na corrente sanguínea por meio de pulsos, que variam em frequência e amplitude, e são reguladas pelo sistema tônico e cíclico do hipotálamo. O sistema tônico produz o nível basal circulante, sempre constante. O sistema cíclico apresenta função aguda, sendo ativo somente por 12 a 24 horas em cada um dos ciclos reprodutivos das fêmeas, mais especificamente durante o estro.

O controle hipotalâmico sobre a atividade dos gonadotrofos se dá pela secreção do hormônio liberador de gonadotrofinas (GnRH). Esse hormônio polipeptídico produzido no hipotálamo tem a função de estimular a liberação das gonadotrofinas (FSH e LH) pela hipófise anterior (adeno-hipófise).

Tanto o LH quanto o FSH são essenciais para estimular a secreção de estradiol pelos folículos ovarianos. A principal função desse esteroide é promover as alterações comportamentais das fêmeas (deixar-se montar, montar sobre outras fêmeas, aumentar a emissão de sons, caminhar mais frequentemente) e físicas (edemaciação da vulva, hiperemia da mucosa vaginal, abertura da cérvix, produção de muco, micção frequente), que ocorrem durante o estro.

Outro esteroide que influencia os processos reprodutivos na fêmea é a progesterona (P4), que é produzida pelo corpo lúteo (localizado no ovário) e pela placenta. Sua principal função fisiológica é manter a gestação. Durante o ciclo estral, informa, por meio do mecanismo de retroalimentação negativa (feedback negativo), ao hipotálamo que a produção e a liberação de GnRH deve ser minimizada, controlando, consequentemente, a liberação das gonadotrofinas.

Outro hormônio hipotalâmico que controla a função reprodutiva é a ocitocina. Apesar de ser sintetizada nos núcleos hipotalâmicos, é armazenada e liberada pela hipófise posterior (também chamada de neuro-hipófise). Por ser um hormônio proteico e poder ser estocada, está envolvida em atividades rápidas, como a ejeção do leite e a contração muscular uterina necessária para o parto. A ocitocina é transportada livremente na circulação sanguínea e, portanto, é metabolizada rapidamente. A disponibilidade desse hormônio é muito rápida; suas concentrações caem rapidamente por ser transportado livremente na circulação e, portanto, é mais facilmente metabolizado. Outra função importante desse hormônio é participar do fenômeno da luteólise.

A prostagladina F2α (PGF2α), produzida no endométrio, atua em sinergismo com a ocitocina. É responsável pela regressão do corpo lúteo e promove contração uterina durante o parto. Durante sua síntese, a PGF2α é transferida da veia útero-ovariana para a artéria ovárica, pelo mecanismo de contracorrente, que evita sua metabolização em PGFM (metabólito da PGF2α) pelos pulmões.

O estradiol sintetizado pelos folículos pré-ovulatórios engatilha a liberação de ocitocina na hipófise, o que estimula a liberação de pequena quantidade de PGF2α uterina. A secreção pulsátil de PGF2α implica a liberação adicional de ocitocina luteal e de PGF2α proveniente do corpo lúteo e do útero. Por esse mecanismo de retroalimentação positiva entre a ocitocina e a PGF2α, obtém-se a concentração de PGF2α necessária para a promoção da luteólise.

Ciclo estral

Fêmeas bovinas são animais poliéstricos não estacionais, ou seja, exibem vários ciclos por ano, independentemente da estação. Cada ciclo tem duração média de 21 dias, sendo a duração do estro, ou cio, de aproximadamente 12 horas em fêmeas zebuínas, e de 18 horas em fêmeas taurinas. Durante o estro, o ovário apresenta o folículo dominante ou pré-ovulatório, dentro do qual se encontra o gameta feminino, ou seja, o oócito. Além do folículo dominante, estão presentes o folículo subordinado e outros folículos antrais, em diferentes fases de desenvolvimento. Esses folículos secretam quantidades significativas do hormônio estradiol, que é responsável pela manifestação de sinais de estro na fêmea, incluindo a mudança de comportamento, a edemaciação da vulva e, principalmente, a aceitação da monta.

Nos órgãos reprodutivos internos (vagina, cérvix e útero), também ocorrem modificações que favorecem o coito, o transporte dos gametas e a fecundação. A ovulação (liberação do oócito) ocorre aproximadamente 30 horas após o início do estro (ou seja, no metaestro), estimulada pelo pico endógeno de LH. Logo após a ovulação, inicia-se o processo de luteinização do folículo ovulado e a formação do corpo lúteo, estrutura responsável pela produção de progesterona. Enquanto as concentrações de progesterona estiverem altas, a liberação de LH ficará baixa, impedindo a maturação final e a ovulação de novos folículos. Se não houver fecundação, o útero liberará a PGF2α, que determina a luteólise (fenômeno que induz a regressão do corpo lúteo). Com a luteólise, um novo ciclo se prepara, as concentrações de FSH e LH aumentam por influência do hormônio GnRH e todo o trato reprodutivo da fêmea fica pronto para uma nova oportunidade de ovular e conceber.

Todas essas modificações endócrinas são acompanhadas de modificações anatômicas dos ovários, as quais podem ser identificadas por ultrassonografia em bovinos (Figura 3).

Figura 3. Imagens ultrassonográficas de ovários de fêmeas bovinas, em diferentes fases do ciclo estral: ovário de fêmea em fase folicular (proestro ou estro) (A); ovário de fêmea em diestro (B). Destacam-se: folículos (1) e corpo lúteo (2). Imagens geradas com aparelhos Mindray DP 20, com probe linear de 7,5 MHz.

Dinâmica folicular durante o ciclo estral

O desenvolvimento folicular antral em bovinos pode ser dividido em duas fases. A primeira delas é de crescimento lento, durando aproximadamente 30 dias. O processo inicia-se com a formação do antro (folículos com diâmetro médio de 300 μm), que se desenvolve até atingir o estádio de pequenos folículos antrais. A segunda fase é de crescimento rápido, podendo durar de 5 a 7 dias, e normalmente é descrita como “onda de crescimento folicular”. O padrão de ondas de crescimento folicular é confirmado por meio da realização de exames ultrassonográficos seriados durante o ciclo estral.

Em cada ciclo, folículos antrais começam a crescer, até atingirem a ovulação ou atresia. Esse fenômeno é denominado de “onda folicular”. Em cada onda, há três fases (Figura 4): a) a fase de recrutamento, quando os folículos terciários emergem para um período de crescimento, sob o estímulo do FSH; b) a fase de desvio ou divergência, quando os receptores de LH são ativados em um dos folículos desse pool de crescimento, e, por mecanismos ainda pouco conhecidos, os outros folículos subordinados entram em atresia; e c) a fase de dominância, quando o folículo selecionado passa a sobressair-se e cresce até ocorrer a ovulação ou atresia, dependendo das concentrações plasmáticas de progesterona.

Figura 4. Fases de uma onda de crescimento folicular na espécie bovina: recrutamento, divergência e dominância.

Fonte: Gentra/UEMS.

Ilustração: Fabiana Andrade Melo-Sterza.

As fêmeas bovinas podem apresentar uma, duas ou três ondas de crescimento folicular em cada ciclo estral. Novilhas zebuínas apresentam maior frequência de três ondas. Isso significa que, enquanto o corpo lúteo estiver presente e ativo, ou seja, secretando progesterona, outros folículos vão se desenvolver e regredir, até que as concentrações de progesterona caiam para níveis basais, por ocasião da luteólise. A partir de então, as concentrações de LH elevam-se significativamente, até alcançarem o pico pré-ovulatório, o qual permite que o folículo dominante dessa onda se torne maduro e ovule. Na maioria das vezes, o padrão de ondas de crescimento folicular, para cada ciclo, mantém-se para o mesmo indivíduo.

Em ciclos naturais, cada onda folicular dura aproximadamente 10 dias, podendo variar entre 6 e 15 dias. As ondas de crescimento folicular podem ser detectadas nos dias 0 e 9 pós-ovulação, para ciclos com duas ondas; ou 0, 9 e 16 dias, para ciclos com três ondas. O crescimento folicular em ondas é um fenômeno contínuo, ou seja, ocorre em animais gestantes e não gestantes, animais lactantes e animais com baixo escore de condição corporal. O fator limitante em todas essas situações é a ovulação, ou seja, não ocorre em animais que estejam em situações de anestro (pós-parto imediato e desnutrição) e sob os efeitos de altas concentrações de progesterona (gestação e fase luteínica do ciclo estral).

A duração do ciclo estral varia de acordo com o número de ondas do ciclo, de forma que os ciclos de duas ondas duram em média 20,7 dias, enquanto os de três ondas duram em média 22 dias. Esse padrão pode, no entanto, ser alterado quando são realizados tratamentos hormonais para a sincronização do estro e/ou da ovulação. O princípio dos tratamentos hormonais, de maneira geral, é o seguinte: a progesterona exógena (implantes vaginais ou auriculares) inibe a secreção de LH, o que promove a supressão do crescimento dos folículos dependentes desse hormônio, enquanto o estradiol exógeno inibe a liberação de FSH, responsável pelo crescimento de folículos menores. Com a retirada do implante de progesterona (mimetização da luteólise), os pulsos de secreção de LH aumentam e cresce um folículo dominante, que ovula entre 48 e 72 horas após a retirada do implante. Para o sucesso dessa técnica, a luteólise endógena deve ser garantida pela aplicação de PGF2α, caso haja um corpo lúteo ativo.

Conforme representado na Figura 5, no dia 0 (D0) do ciclo estral, ocorre a ovulação e tem início a primeira onda folicular. Os folículos antrais pequenos possuem receptores para FSH e crescem sob a influência de concentrações crescentes desse hormônio. A divergência ocorre quando o folículo atinge 6,5 mm de diâmetro, porém o folículo dominante (13 mm) entrará em atresia se as concentrações de LH estiverem baixas, as quais são influenciadas pelas altas concentrações de progesterona. O mesmo ocorre na segunda onda, com a diferença de que o maior folículo apresenta um diâmetro menor do que o observado nas outras ondas (11 mm), o que se deve provavelmente ao fato de que as concentrações de progesterona estão mais altas nesse momento. O intervalo entre a segunda e a terceira onda é menor por causa das altas concentrações de progesterona. Depois da luteólise e da redução das concentrações de progesterona, a produção de estradiol pelos folículos aumenta e, paralelamente, elevam-se as concentrações de LH, em amplitude e frequência, até que seja alcançado o pico responsável pelo desencadeamento da maturação final e a ovulação do folículo dominante.

Figura 5. Ciclo estral de fêmea Bos indicus, com três ondas de crescimento folicular.

Fonte: Gentra/UEMS.

Ilustração: Fabiana Andrade Melo-Sterza.

Diferenças entre a fisiologia do ciclo estral entre fêmeas taurinas e zebuínas

A fisiologia reprodutiva de vacas zebuínas difere daquela de vacas taurinas, sendo as principais diferenças expressas nas seguintes características: área de tecido luteal, capacidade de secreção de LH, diâmetro do folículo dominante, duração do estro e diâmetro folicular no momento da divergência e na ovulação.

Em zebuínos, há relatos de maior incidência de ciclos com três ondas, sendo notada a presença de até quatro ondas de crescimento folicular por ciclo estral (RHODES et al., 1995; VIANA et al., 1998; ZEITOUN et al., 1996). Essas variações podem ocorrer por conta de vários fatores, como dieta, manejo, produção de leite, período de lactação e pós-parto imediato. Em fêmeas da raça Holandesa, o desvio tem início por volta do dia 2,8 após a emergência, quando o folículo dominante atinge em média 8,5 mm e o folículo subordinado 7,2 mm. Já em novilhas da raça Nelore, descreve-se um período de 2,5 a 2,7 dias após a emergência.

A emergência da primeira e da segunda onda de crescimento folicular é definida como o dia em que, no mínimo, dois folículos ovarianos (> 4 mm) são visualizados pela primeira vez numa avaliação ultrassonográfica. Durante muitos anos, acreditou-se que a emergência folicular era marcada pelo crescimento de um número constante, entre 23 e 25 folículos antrais. No entanto, com a evolução do emprego da ultrassonografia na avaliação da dinâmica folicular ovariana, verificou-se que, em zebuínos, particularmente na raça Nelore, são recrutados cerca de 30 a 50 folículos por onda, de forma que apresentam superioridade numérica em relação aos taurinos. Os motivos que justificam essa diferença ainda não estão totalmente esclarecidos, mas uma das possibilidades refere-se ao fato de que os Bos indicus apresentam maiores níveis circulantes de fator de crescimento semelhante à insulina (IGF-1) e insulinas livres, os quais aumentam a sensibilidade das células da granulosa ao FSH, favorecendo, assim, o recrutamento folicular (ALVAREZ et al., 2000; SIMPSON et al., 1994).

O desvio folicular em Bos taurus ocorre quando o folículo dominante atinge 8,5 mm a 9,0 mm, e o maior folículo subordinado atinge 7,5 mm a 8,0 mm. Em fêmeas Nelore, o desvio ocorre quando o maior folículo alcança em média 5 mm a 6,5 mm, sendo esse dificilmente acompanhado por outro folículo dominante. O fenômeno da codominância (mais de um folículo dominante por onda) é mais comum de ocorrer em vacas de alta produção leiteira.

O diâmetro máximo do folículo dominante é variável, quando comparado em fêmeas de origem europeia e zebuína. Em Bos taurus e Bos indicus são descritos, para a primeira e a segunda onda de crescimento folicular, diâmetros de 17,1 mm e 16,5 mm, e de 11,3 mm a 12,1 mm, respectivamente. Baseando-se nesses valores, é possível verificar que o diâmetro máximo do folículo dominante é maior nos animais de origem europeia, provavelmente porque, neles, a taxa de crescimento folicular é menor, e isso é refletido diretamente no tamanho do corpo lúteo (BO et al., 1993a, 1993b; FIGUEIREDO et al., 1997; Ginther et al.,1989b; RHODES et al., 1995). Em fêmeas da raça Nelore, os folículos dominantes que apresentam receptores ativos para LH são menores do que os de Bos taurus.

Os corpos lúteos encontrados em fêmeas Bos indicus têm, em média, 15 mm de diâmetro, enquanto, em Bos taurus, em média, 18 mm (Bo et al., 1993b; Kastelic et al., 1990). Essas diferenças têm importantes aplicações práticas, pois a identificação do corpo lúteo é difícil em animais Bos indicus. As concentrações de progesterona alcançam um platô entre os dias 8 e 13,4 do ciclo estral e permanecem altas até a luteólise. A regressão do corpo lúteo em vacas não gestantes ocorre entre os dias 16 e 19 do ciclo estral, tanto em zebuínos quanto em taurinos.

Vacas em lactação apresentam corpos lúteos maiores, elevada concentração de progesterona durante a fase luteal média (> 6 dias do ciclo) e maior frequência de pulsos de LH durante a mesma fase luteal, o que está provavelmente associado com o desenvolvimento folicular que essas fêmeas apresentam.

Fêmeas Bos indicus apresentam maior população folicular antral, com a especificidade de possuírem maior quantidade de folículos menores que 5 mm de diâmetro do que novilhas Bos taurus. Reflexo disso são os excelentes resultados que fêmeas Bos indicus apresentam quando submetidas a aspiração folicular guiada por ultrassonografia, pois uma quantidade significativamente maior de oócitos aspirados é recuperada.

Há evidências de que as concentrações de alguns fatores locais ovarianos, tais como a insulina e o IGF, sejam diferentes entre animais Bos indicus e Bos taurus (BURATINI et al., 2000). Por exemplo, vacas Brahman apresentam maiores concentrações plasmáticas de IGF-1 e menores concentrações plasmáticas de FSH do que vacas Angus (ALVAREZ et al., 2000; SIMPSON et al., 1994), o que permite inferir que o maior número de folículos em vacas Brahman, mesmo com menores concentrações de FSH, seja devido às altas concentrações de IGF-1.

Estudos anteriores já relataram as diferenças na dinâmica folicular segundo a raça e a subespécie em bovinos, e alguns desses resultados estão sumarizados na Tabela 1. Na Figura 6, podem ser observadas imagens sequenciais de avaliação da dinâmica folicular de uma fêmea bovina, desde o início de uma onda até o dia da ovulação.

Tabela 1. Dinâmica folicular em fêmeas bovinas.

Raça

Subespécie

Ondas por ciclo estral (%)

Folículo pré-ovulatório (mm)

Referência

2

3

4

Nelore

Bos taurus indicus

26,7

66,7

11,0 ± 0,9

Borges et al. (2003)

Gir

Bos taurus indicus

24,0

68,0

13,0 ± 1,7

Borges et al. (2003)

Guzerá

Bos taurus indicus

37,5

50,0

12,5

14,0

Coutinho et al. (2007)

Holandesa

Bos taurus taurus

62,0

37,0

7,8 ± 0,7

Ginther et al. (2013)

Criollo

Bos taurus taurus

77,3

22,7

7,8 ± 0,2

Quezada-Casasola et al. (2014)

Figura 6. Imagens ultrassonográficas da dinâmica folicular de novilhas da raça Pantaneira. D0/D2: Início da onda de crescimento folicular, caracterizada por folículos de tamanho pequeno (1). D5: Presença do folículo pré-ovulatório (2). D7: Ausência do folículo pré-ovulatório, indicando que a ovulação ocorreu.

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Capítulo 2
Utilização da ultrassonografia na reprodução de fêmeas bovinas

Ériklis Nogueira

Gisele Zoccal Mingoti

Alessandra Nicacio

Juliana Corrêa Borges Silva

Carlos Antônio Carvalho Fernandes

Walvonvitis Baes Rodrigues

Heitor Romero Marques Júnior

Aplicação da ultrassonografia em bovinos

A aplicação da ultrassonografia ou ecografia em bovinos e equinos iniciou-se na década de 1980 e foi um dos passos mais importantes para o estudo e a compreensão dos eventos que ocorrem durante o ciclo estral e a gestação (GINTHER, 2014). A ultrassonografia tem diversas aplicações como método de diagnóstico em bovinos, especialmente no exame do aparelho reprodutor de fêmeas, com a vantagem de não ser uma técnica invasiva. A técnica permite visualizar as estruturas anatômicas de maneira bem semelhante à imagem real, obtida com um corte. É, ademais, um procedimento relativamente simples e seguro, tanto para o animal quanto para o operador. Seu uso pode, porém, ser limitado pela falta de qualificação de mão de obra, que precisa ser muito bem treinada, e pelo custo do equipamento – consequentemente, pela razão custo-benefício de cada exame. Graças à rápida difusão da técnica entre os profissionais da área e à boa oferta de aparelhos no mercado, aliadas à disponibilidade de profissionais aptos a realizar os exames, esse cenário vem mudando, resultando em crescente adesão ao seu uso nos sistemas de produção.

Como pode ser aplicada no campo e fornecer diagnóstico imediato, a ultrassonografia reprodutiva, na maioria dos casos, vem se popularizando. E tem outras aplicações, como: a) presta-se a avaliar questões associadas à ciclicidade e à puberdade, e/ou a diagnosticar precocemente a prenhez ao final da estação de monta, ou depois de protocolos de sincronização de cio e inseminação artificial, cooperando, assim, com o manejo de propriedades rurais; e b) vem sendo utilizada em programas de produção de embrião, por meio da utilização de aspiração folicular, da avaliação de receptoras para a transferência de embrião, do diagnóstico precoce de gestação, da avaliação de perdas gestacionais e da sexagem embrionária.

Este capítulo discorre sobre o funcionamento do ultrassom. Para tanto, as informações são complementadas com imagens, que mostram a gama de aplicações dessa técnica na reprodução bovina, particularmente na reprodução de fêmeas.

Princípios básicos da formação de imagens

A ultrassonografia baseia-se no princípio do uso de ondas sonoras de alta frequência, medidas em megahertz (1 MHz = 1.000.000 de ondas de som por segundo), que são enviadas e refletidas para produzir imagens dos tecidos. As ondas acústicas do ultrassom são ondas de pressão, geradas pela vibração (pela compressão e descompressão alternadas) de cristais presentes no transdutor do equipamento. Esses cristais possuem propriedades piezoelétricas; assim, quando submetidos a correntes elétricas alternadas, produzem ondas sonoras em resposta à vibração (PIERSON et al., 1988a, 1988b).

Os aparelhos de ultrassom são compostos pelo monitor, também chamado de “unidade de formação de imagens” ou “console”, e pelo transdutor ou probe. O transdutor é formado por um cabo de fibra ótica e possui, em sua extremidade, os cristais, com propriedade de conversão de impulsos elétricos em ondas sonoras. Essas ondas têm a propriedade de se propagarem pelos tecidos orgânicos de forma distinta, já que os tecidos apresentam diferentes resistências acústicas. Dessa forma, à medida que as ondas atravessam um determinado corpo, parte é refletida na forma de um eco e parte prossegue interagindo com os tecidos mais profundos. A densidade e a organização de um tecido determinam que a proporção da onda ultrassonográfica seja refletida ou continue se propagando. Essas particularidades definem a característica ultrassonográfica gerada pelo tecido.

A intensidade e a frequência das ondas que retornam ao transdutor são proporcionais à distância e à consistência dos tecidos por onde passam. As imagens são geradas em tonalidades distintas de cinza, variando do branco ao preto. Os líquidos (folículos, âmnios) são observados na tela como imagens negras, pois não refletem as ondas ultrassonográficas, e são denominados “não ecogênicos” (“anecogênicos” ou “anecoicos”). Tecidos densos, como os ossos, refletem quase a totalidade das ondas e são denominados “hiperecogênicos” (ou “hiperecoicos”), apresentando-se como imagens brancas. As outras estruturas apresentam diferentes tonalidades de cinza, dependendo da densidade.

As ondas refletidas pelos tecidos são reconvertidas pelos cristais do transdutor em pulsos elétricos. No console, os pulsos são amplificados, compensados para diferenças de intensidade e utilizados por um receptor na geração de uma imagem bidimensional. O tempo entre a emissão do pulso elétrico e o retorno do eco é utilizado no cálculo da distância entre a estrutura e o transdutor. Imagens de tecidos mais distantes do transdutor são apresentadas na porção inferior da tela, dependendo do ajuste do aparelho (PIERSON et al., 1988b).

As ondas que atravessam os tecidos são geralmente muito delgadas (2 mm); portanto, as imagens produzidas equivalem a um corte histológico. Os limites entre os tecidos adjacentes de densidades diferentes são denominados de “interfaces”, que podem ser formadas por diferenças muito pequenas de intensidade. As interfaces permitem delimitar os órgãos em estudo, enquanto as densidades diferentes possibilitam fazer a avaliação das variações normais ou anormais dos órgãos. Tecidos de diferentes resistências acústicas, quando em contato, produzem interfaces que permitem diferenciá-los (FISSORE et al., 1986).

A imagem ultrassonográfica representa, de forma aproximada, uma “fatia” do tecido em questão. As diferenças relativas ao tipo e à resolução dos aparelhos de ultrassom são resultantes da variação na disposição dos cristais no transdutor, da frequência da onda produzida e do processamento dos impulsos elétricos que retornam ao console. O tipo de transdutor a ser utilizado depende da aplicação principal, do tamanho das estruturas a serem avaliadas e de sua localização em relação à posição do transdutor. Para a ultrassonografia reprodutiva em grandes animais, os transdutores mais utilizados são os lineares de 5 MHz a 9 MHz, para a abordagem transretal. Transdutores intravaginais (convexos) também são utilizados rotineiramente para a realização de aspiração folicular. O formato da extremidade dos transdutores e o posicionamento dos cristais são adequados ao tipo de utilização principal de cada transdutor (GINTHER, 1986).

Tipos de tecnologia empregada nos aparelhos

Os quatro modos mais comumente usados em equipamentos de ultrassonografia são:

Modo A (modo amplitude): É uma imagem unidimensional das amplitudes de eco para várias profundidades, mostrada como uma linha gráfica. Alguns instrumentos para mensuração da gordura subcutânea ou para diagnóstico de prenhez utilizam esse modo. A maioria dos equipamentos possui essa função, porém é pouco empregada na rotina de avaliação.

Modo B (modo de brilho): Essa é a imagem padrão de ultrassom, que apresenta uma imagem bidimensional representante de uma fatia do tecido. É demonstrada como pontos individuais (pixels) com variações na tonalidade cinza. É o método mais utilizado.

Modo M (modo de movimento): Esse modo, que está disponível em alguns aparelhos de uso em medicina veterinária, avalia estruturas em movimento (ex.: coração pulsante); por isso, é mais utilizado em avaliações cardiocirculatórias. A diferença na profundidade de reflexão é mostrada como uma linha gráfica.

Doppler: Indica, numa escala de cores, variações de velocidade e direção de movimentos nos tecidos. Costuma ser utilizado para detectar variações de fluxo sanguíneo. Esse tema será abordado no Capítulo 3.

Atualmente, a maioria dos aparelhos trabalha com duas ou mais tecnologias, de forma associada ou não. Antes de adquirir um aparelho, deve-se ter em mente que, embora exista grande potencial de aplicações, na maioria das vezes um único aparelho não é capaz de executar de forma satisfatória todas as atividades desejadas, principalmente sem a complementação com alguns acessórios. Assim, para se decidir sobre o equipamento a ser adquirido, é preciso avaliar se atendem às seguintes características:

Resolução da imagem, primeira característica a ser considerada.

Tipo de transdutor, que pode ser linear, convexo ou setorial, ou ter outros formatos, conforme a aplicação.

Frequência de onda, que vai depender da facilidade de acesso e do tamanho das estruturas que se pretende analisar.

Características do software: é preciso avaliar se o software permite congelar a imagem, medir estruturas, aplicar zoom, amplificar e duplicar imagens, gravar imagens e vídeos, entre outros.

Tipos de uso, que pode ser fixo ou móvel.

Fonte de energia própria e auxiliar (baterias internas ou conexões com baterias externas).

Tamanho da tela.

Garantia, assistência técnica, peças de reposição e outros.

Custo.

Transdutores ou probes

Este acessório é responsável pela emissão das ondas e pelo recebimento das ondas refletidas, que geram a imagem. Deve sempre se adequar à principal forma de utilização do aparelho, para garantir o máximo de desempenho do equipamento. É a parte do aparelho que merece mais cuidado, pois é frágil e de custo elevado.

Há vários tipos de transdutor, entre os quais se destacam os lineares, os convexos e os setoriais.

Lineares: Neles, os cristais são arranjados em fila, e a imagem resultante é tipicamente retangular. Esse tipo de transdutor é apropriado a avaliações reprodutivas, feitas através da via transretal (Figura 1).

Figura 1. Ovários: a seta indica os folículos (A); a seta indica o corpo lúteo (B). Imagens geradas por aparelho Mindray DP 20, com probe linear de 5,0 MHz.

Convexos: São apropriados à visualização externa (ex.: através da parede abdominal) ou do tórax (entre costelas). Fornecem imagem triangular (no formato de um pedaço de pizza) e são bastante utilizados nos procedimentos de aspiração folicular em bovinos (Figura 2) ou mesmo de avaliação reprodutiva de pequenos ruminantes.

Figura 2. Ovário de novilha com múltiplos folículos no segundo dia do ciclo estral. Imagem gerada por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe convexa de 7,5 MHz.

Setoriais: Possuem sondas com uma cabeça móvel e são particularmente adequados à visualização por via transvaginal. Têm várias aplicações, entre as quais a aspiração folicular, com imagens feitas por aquela via. Fornecem uma imagem triangular (no formato de um pedaço de pizza). Sua aplicação vem diminuindo sensivelmente, pois que estão sendo substituídos por transdutores convexos.

Frequência de onda

O tipo de transdutor a ser utilizado depende da finalidade principal da avaliação e do tamanho e da localização das estruturas a serem avaliadas em relação à posição do transdutor. A maioria dos equipamentos está disponível com transdutores de 3,5 MHz, 5,0 MHz e 7,5 MHz ou 9,0 MHz (ou frequências próximas, como 6,0 MHz e 8,0 MHz). Quanto mais alta a frequência, maior a resolução (habilidade em reconhecer dois objetos separados), porém menor é a penetração. Então, com um transdutor de 7,5 MHz, é possível detectar objetos de diâmetro muito pequeno (como de 1 mm), porém a penetração pode estar limitada a aproximadamente 15 cm. Por sua vez, com um transdutor de 3,5 MHz, apenas objetos de 5 mm de diâmetro podem ser detectados, mas a penetração de 40 cm é possível (GINTHER, 1995, 1998). Equipamentos mais modernos podem ter resolução superior numa mesma frequência.

O poder de resolução – que é a menor distância observável que separa dois pontos – e a claridade da imagem são resultados do tipo de transdutor utilizado e da qualidade da máquina ou do monitor. Geralmente, para a avaliação do trato reprodutivo feminino, não é necessária grande penetração. Os transdutores de 5,0 MHz e 7,5 MHz são ideais para examinar ovários e útero, bem como para diagnosticar gestação precoce e sexagem fetal. Em casos de prenhez avançada, transdutores de 3,5 MHz são os mais apropriados, pois o crescente tamanho fetal resulta na movimentação anteroventral do útero, o que dificulta a visualização do feto (acesso difícil pela via retal). Transdutores intravaginais (convexos) de 5,0 MHz a 7,5 MHz também são utilizados rotineiramente para a realização de aspiração folicular.

Transdutores de baixa frequência (3,5 MHz) também são comumente usados para a avaliação de carcaça (ver Capítulo 6) e também podem ser utilizados para a visualização transabdominal do trato reprodutivo, para a detecção de estádios mais avançados de prenhez em bovinos, função que, aliás, é pouco utilizada.

Artefatos e outras características da imagem formada

Durante a formação da imagem, normalmente algumas características são observadas, sendo elas (GINTHER, 1986):

Impedância acústica: é a resistência dos tecidos à propagação das ondas sonoras.

Reflexão: é a proporção de ondas sonoras que retornam ao transdutor. A reflexão é máxima quando a interface é perpendicular ao transdutor.

Absorção: é a capacidade de os tecidos capturarem a energia das ondas sonoras, que tipicamente aumentam a temperatura tecidual. No exame ultrassonográfico, a quantidade de energia presente nas ondas é muito baixa e com efeitos biológicos mínimos, em exames de rotina.

Além das características citadas, outros artefatos podem ocorrer, os quais estão descritos a seguir (GINTHER, 1986):

Atenuação: é o progressivo enfraquecimento das ondas sonoras ao longo de sua passagem pelos tecidos (Figura 3).

Figura 3. Atenuação de onda ultrassonográfica (seta). Imagem gerada por aparelho Mindray DP 20, com probe linear de 7,5 MHz.

Interfaces teciduais: são junções de tecidos que possuem diferentes densidades (portanto, diferentes impedâncias acústicas). Essas interfaces produzem frequentemente uma linha distinta, que claramente define os limites entre diferentes tecidos ou órgãos adjacentes (Figura 4).

Figura 4. Interface tecidual (seta). Imagem gerada por aparelho Mindray M5, com probe linear de 7,5 MHz.

Sombreamento (ou sombra acústica): é o fenômeno causado por bloqueio ou desvio dos feixes sonoros, devido, por exemplo, a tecido denso, como o osso (Figura 5).

Figura 5. Sombreamento: ao lado de corpo lúteo (A); abaixo de feto (B). Imagens geradas por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe linear de 8,0 MHz.

Intensificação (ou transmissão direta): é a transmissão acentuada das ondas sonoras através de fluidos, resultando em ecos mais brilhantes sob a estrutura (Figura 6).

Figura 6. Intensificação da imagem: seta mostra a intensificação da imagem abaixo do folículo ovariano (A); seta mostra a intensificação da imagem abaixo de útero gestante (B). Imagens geradas pelos aparelhos Mindray DP 20 (A), com probe linear de 7,5 MHz, e Pie Medical-Falcon 100 (B), com probe linear de 6,0 MHz.

Reverberação: é o fenômeno que ocorre quando um eco salta entre duas interfaces fortes, até exaurir os pulsos de ultrassom. Em consequência, há uma série de linhas ecodensas, paralelas umas às outras, a uma mesma distância de separação, até que os pulsos de ultrassom sejam exauridos (Figura 7).

Figura 7. Reverberação na imagem (seta). Imagem gerada por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe linear de 8,0 MHz.

Refração: é a angulação (desvio) das ondas sonoras quando cruzam interfaces não perpendiculares à onda (similar à luz entrando na água). Isso pode resultar em sombras abaixo de estruturas curvas (ex.: abaixo de um folículo ovariano) (Figura 8).

Figura 8. Cisto folicular, apresentando refletor especular (A) e refração (B). Imagem gerada por aparelho Mindray DP 20, com probe linear de 7,5 MHz.

Dispersão: é um fenômeno que ocorre quando uma onda sonora encontra uma superfície irregular ou menor que o comprimento de onda do ultrassom.

Refletor especular: é uma linha ecodensa, paralela à face do transdutor. É produzido quando o feixe ultrassonográfico incide sobre uma interface macia, mais larga que o feixe e paralela ao transdutor. Refletores especulares são comumente vistos em imagens reprodutivas (ex.: endométrio uterino, topo do folículo ovariano) (Figura 8).

Refletor não especular: é uma linha ecodensa, paralela à face do transdutor. Ocorre quando uma interface é irregular ou mais estreita que o pulso, o seja, quando uma onda volta para a direção de onde veio, ao ser refletida por essa interface.

Avaliação do aparelho reprodutor feminino

A técnica de ultrassonografia transretal tem múltiplas aplicações na avaliação morfológica e funcional do aparelho reprodutor feminino em bovinos. O uso do ultrassom possibilitou grandes avanços no estudo da fisiologia ovariana, particularmente na caracterização do padrão de crescimento folicular durante a puberdade, o diestro, a gestação inicial, o puerpério e sob estimulação hormonal. O desenvolvimento, a manutenção e a regressão luteal também podem ser monitorados em todas essas fases. A seguir, serão descritas as principais aplicações do ultrassom na reprodução bovina, bem como a técnica de exploração de cada parte do trato reprodutivo e suas particularidades.

Técnica de exploração e avaliação do útero

Para garantir um eficiente exame de ultrassom na vaca, o animal deve estar bem contido e o aparelho de ultrassom deve estar colocado a uma distância segura, posicionado preferencialmente em local oposto ao braço do operador e na altura dos seus olhos. O reto do animal deverá ser evacuado antes da introdução do transdutor; por vezes, convém fazer uma exploração manual preliminar da topografia do trato reprodutivo antes de se dar início ao exame ultrassonográfico. A habilidade para examinar úteros não prenhes é essencial para o diagnóstico precoce da prenhez e exame do trato reprodutivo de forma geral. Deve-se ajustar a posição do transdutor para que seja obtida uma boa imagem do corno uterino. A visão linear do corno é mais útil em seções sagitais, pois seções angulares são mais difíceis de interpretar. Já as seções transversais podem auxiliar a diagnosticar conteúdos sob a luz de um determinado órgão.

Geralmente, o transdutor é posicionado dorsalmente ao corno uterino ou aproximadamente na linha média, dirigido ventrolateralmente. Porém, o transdutor também pode ser posicionado de maneira extremamente lateral e dirigido para a linha média. Para a realização de um exame sistemático dos cornos uterinos, recomenda-se iniciar pela cérvix e progredir distalmente, ao longo de cada um dos cornos uterinos (Figura 9).

Figura 9. Aparelho reprodutor bovino, demonstrando a utilização de sonda transretal para avaliação ginecológica (vista lateral e cranial).

Ilustração: Neimar Corrêa Severo.

A cérvix aparece como uma estrutura ecodensa irregular, sendo um bom ponto de referência (Figura 10). Localizado cranialmente à cérvix, o útero avança para a frente e, então, curva-se ventralmente (primeira curvatura). Segue caudal e dorsalmente (segunda curvatura) e, em seguida, cranialmente. Podem ser obtidos vários “cortes” dos cornos em uma mesma imagem, graças à sua disposição. Em geral, o corpo uterino e a porção proximal dos cornos são os de mais fácil visualização, aumentando-se a dificuldade conforme se progride distalmente.

Figura 10. Cérvix bovina com visualização dos anéis cervicais (setas). Imagem gerada com aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe linear de 8,0 MHz.

A aparência ultrassonográfica do útero e das estruturas presentes sobre os ovários ajuda a determinar o estádio do ciclo estral. O enovelamento dos cornos uterinos é máximo durante a metade do diestro e mínimo durante o estro. O volume de fluidos intrauterinos começa a aumentar 3 a 4 dias antes do estro, e atinge o máximo, por volta do estro, e então declina até o terceiro dia do ciclo estral. Se um animal estiver em estro, o acúmulo de líquido no útero poderá ser confundido com a fase inicial de gestação, o que poderá ser evitado realizando-se a avaliação dos ovários, pois, na fase de estro, o corpo lúteo não estará presente (Figura 11). Ademais, na maioria dos casos, durante o cio, é encontrado líquido em ambos os cornos, ao passo que, na gestação inicial, o acúmulo de líquidos fetais é encontrado em apenas um corno. Somente após o dia 32 da gestação é que a vesícula embrionária se estenderá até o corno uterino contralateral; a partir de então, poderá ser vista em ambos os cornos.

Figura 11. Útero de vaca não gestante em fase de proestro, com pequena quantidade de líquido (seta). Ao lado, observa-se o folículo pré-ovulatório. Imagem gerada por aparelho Minday DP 20, com probe linear de 7,5 MHz.

A ecotextura uterina é relativamente uniforme durante o diestro (Figura 12), mas torna-se muito mais variável próximo ao momento do estro (Figura 11).

Figura 12. Cornos uterinos não gestantes, em fase de diestro, em cortes transversais (setas). Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A), com probe linear de 8,0 MHz, e Mindray DP 20 (B), com probe linear de 7,5 MHz.

Em casos de metrite ou piometra, os fluidos intrauterinos apresentam graus distintos de ecodensidade, variando de um aspecto floculento até um intensamente branco. Pelo contrário, a imagem do fluido intrauterino fisiológico encontrado no momento do estro ou durante a prenhez é não ecoica (preta) (Figura 11).

A bexiga aparece em um exame de ultrassom como uma estrutura anecoica, com variações de tamanho e aparência de sua parede, dependendo da quantidade de urina retida (Figura 13). Com a bexiga cheia, a maior parte do campo aparece como uma imagem preta; mas, estando o órgão relativamente vazio, a mucosa pode ser visualizada como uma superfície hipoecoica enrugada, no contorno do órgão. A bexiga pode servir de ponto de referência para o exame ginecológico, mas pode confundir o operador inexperiente em relação a gestações iniciais. Um operador experiente deve ser capaz de identificar a bexiga e eliminar sua imagem da avaliação do trato reprodutivo.

Figura 13. Bexiga urinária da espécie bovina, repleta de urina. Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A), com probe linear de 8,0 MHz, e Mindray DP 20 (B), com probe linear de 7,5 MHz.

Ovários

Os ovários são estruturas fáceis de serem avaliadas e podem até mesmo ser o ponto de referência durante o exame. São verificadas principalmente as estruturas funcionais, como folículos e corpos lúteos, porém o estroma ovariano produz imagem com ecotextura mista de sinais hipo- e hiperecoicos, dependendo do estado fisiológico do órgão.

Os folículos ovarianos aparecem como estruturas anecoicas (em preto), geralmente com a borda delgada e bem definida (Figura 14). Os folículos podem parecer irregulares por causa da compressão, por outras estruturas ovarianas, e dois folículos próximos podem parecer como sendo um só, porém um exame minucioso permitirá a detecção de uma linha ecodensa (em branco), que representa as paredes foliculares. O congelamento da imagem permite determinar o diâmetro de um folículo no seu máximo tamanho, podendo-se também realizar a mensuração da altura e da largura para calcular a média entre elas ou a área. Quando a borda superior de um folículo se apresenta difusa, a redução da pressão para baixo sobre o transdutor (até que haja pressão suficiente apenas para manter contato com a mucosa retal) pode reduzir ou eliminar esse artefato (VIANA et al., 2004).

Figura 14. Ovários bovinos com folículos de vários tamanhos: folículos em início de crescimento (A e B); folículo dominante (seta) ao lado de um corpo lúteo cavitário (C). Imagens geradas pelos aparelhos Mindray M5 (A), com probe linear de 5 MHz, e Mindray DP 20 (B e C), com probe linear de 7,5 MHz.

A avaliação ultrassonográfica de folículos de vários tamanhos apresenta boa correlação com a sua inspeção visual após dissecação (Tabela 1), segundo relatado por Pierson e Ginther (1987). A identificação de folículos no limite de resolução do equipamento pode, porém, estar sujeita a erros, pois esses podem ser confundidos com veias e artérias ovarianas (Figura 15). A individualização e o monitoramento dos folículos também podem ser comprometidos em ovários que possuam grande população folicular, o que pode causar sub- ou superestimação do número real de folículos. Na prática, essa diferença de estimativa não é significativa e não compromete as avaliações. Por sua vez, folículos em fase final de desenvolvimento, com maior volume, tendem a sofrer maior efeito da compressão de estruturas adjacentes em seu formato e, por isso, aparecem frequentemente ovalados ou deformados. Nesses casos, a mensuração dos folículos deve ser feita pela média entre sua maior e menor dimensão. O efeito da compressão é particularmente visível em ovários durante o tratamento para superovulação, nos quais existe um grande número de folículos em fase final de desenvolvimento (VIANA et al., 2004) (Figura 16).

Tabela 1. Avaliação da população folicular por ultrassonografia ou por exame post mortem.

Tamanho de folículos

Ultrassom

Histologia

Correlação

De 2 mm a 3,9 mm

16,4 ± 0,7

15,5 ± 0,8

0,90

De 4 mm a 6,9 mm

5,4 ± 0,4

5,4 ± 0,4

0,80

De 7 mm a 10,9 mm

1,6 ± 0,2

1,6 ± 0,2

0,89

≥ 11 mm

0,6 ± 0,1

0,7 ± 0,1

0,85

Total de folículos ≥ 2 mm

21,8 ± 0,9

20,8 ± 0,4

0,92

Maior folículo

10,6 ± 0,6

10,6 ± 0,6

0,97

Fonte: Pierson e Ginther (1987).

Figura 15. Vasos sanguíneos próximos ao ovário (setas). Imagem gerada por aparelho Mindray DP 20, com probe linear de 7,5 MHz.

Figura 16. Ovários de vacas superovuladas com FSH, apresentando múltiplos folículos e diferentes populações foliculares. Imagens geradas pelos aparelhos Mindray M5 (A), com probe linear de 5,0 MHz, e Pie Medical-Falcon 100 (B, C e D), com probe linear de 8,0 MHz.

Recentemente, alguns estudos têm avaliado a contagem folicular antral (CFA) e suas relações com a fertilidade de vacas. Mesmo considerando que o número de folículos antrais é altamente variável entre fêmeas bovinas, existe alta repetibilidade no mesmo animal. A seleção de doadoras baseada na CFA tem sido considerada uma importante estratégia graças à alta correlação entre o número de folículos antrais e a produção de embriões (in vivo e in vitro), que tem sido observada (IRELAND et al., 2011). A CFA, utilizando-se a ultrassonografia, pode ser feita em qualquer estádio do ciclo estral das fêmeas bovinas adultas (BURNS et al., 2005; SILVA-SANTOS et al., 2014). E a mensuração de apenas um dos ovários parece ser suficiente para classificar doadoras com alta, média ou baixa população folicular (OLIVEIRA JUNIOR et al., 2015). No entanto, apesar de ser um forte critério para a seleção reprodutiva de fêmeas Bos taurus, resultados contraditórios foram observados sobre a CFA em Bos indicus. Existem resultados que indicam melhor eficiência reprodutiva de animais com baixa CFA, e outros que indicam que as fêmeas com média CFA são mais eficazes, e também que maior eficiência reprodutiva pode ser observada em fêmeas Zebu de alta CFA (MOROTTI et al., 2015). Em outro estudo com Bos indicus (Nelore), observou-se correlação positiva com a produção de embriões in vitro, mas não com a taxa de concepção em fêmeas submetidas à inseminação artificial em tempo fixo (MOROTTI et al., 2017).

Além disso, a determinação dos níveis de hormônio antimullerino (AMH) circulante e CFA em bovinos pode ser útil para identificar animais que provavelmente teriam respostas superovulatórias superiores aos tratamentos com gonadotrofinas ou que seriam os melhores doadores de oócitos para a produção in vitro de embriões (Pive), mas não se pode afirmar que esses parâmetros possam prever maior eficiência reprodutiva (BARUSELLI et al., 2015).

Especial atenção deve ser dada aos vasos sanguíneos ováricos (artérias e veias), pois eles podem ser confundidos com folículos pequenos ou medianos. As veias são vistas entrando caudalmente no ovário, sendo visualizadas como duas ou três estruturas redondas anecoicas, com 2 mm a 5 mm de diâmetro (Figura 15). Alterando-se o plano de avaliação, a forma da imagem dessas estruturas pode ser modificada (de redondas a alongadas), o que ajuda a diferenciar os folículos, que continuam relativamente arredondados em todos os planos. As artérias aparecem isoladas ou como um agrupamento de áreas redondas anecoicas, menores que 2 mm de diâmetro, ao redor das veias. São visualizadas em corte transversal, sempre aparecendo em formato redondo.

A palpação retal permite a identificação e a avaliação subjetiva do corpo lúteo e, por sua praticidade e facilidade de execução, ainda é o método mais utilizado na sua avaliação. Contudo, essa técnica apresenta algumas limitações – que se devem à sua baixa precisão e consequente possibilidade de erros – tanto no estabelecimento da presença quanto do estádio funcional do corpo lúteo. Os erros na avaliação morfológica do corpo lúteo estão associados à grande variação na forma e no tamanho do ovário, à sua área de projeção na superfície ovariana e à presença de corpos lúteos císticos. Erros de diagnóstico são mais frequentemente associados à palpação de ovários grandes, com morfologia compatível com a presença de um corpo lúteo, em animais em anestro, ou à palpação de ovários pequenos e sem evidência de atividade luteal, mas com corpos lúteos inclusos. A ultrassonografia demonstrou ser uma ferramenta importante na avaliação da função luteal, permitindo a completa visualização do tecido luteal, o que possibilita maior precisão na identificação e na mensuração do corpo lúteo, sem, contudo, eliminar completamente os erros de avaliação dessa estrutura, particularmente no final do ciclo, quando sua ecogenicidade se aproxima daquela observada no restante do estroma ovariano. A evolução dos equipamentos de ultrassonografia, contudo, tem levado à obtenção de imagens com definição cada vez maior.

A identificação do corpo lúteo pode ser difícil quando feita imediatamente após a ovulação, mas, em geral, é detectável 1 ou 2 dias depois, como corpo hemorrágico (Figura 17). Na fêmea cíclica, o corpo lúteo regride alguns dias antes do estro, mas costuma ser visível, até a ovulação subsequente (às vezes, até 2 ou 3 dias após a próxima ovulação). Daí em diante, o corpo lúteo não pode ser distinguido do estroma ovariano (KASTELIC et al., 1990). Uma cavidade central forma-se em cerca de 70% das estruturas, sendo um achado não patológico, que recebe a denominação de “corpos lúteos cavitários”. Essas cavidades variam em tamanho (de 2 mm até mais que 20 mm) e, independentemente do tamanho, são detectadas pela primeira vez após a ovulação, obtendo seu tamanho máximo 5 a 7 dias após a ovulação; em seguida, desaparecem. A cavidade central costuma ser arredondada e anecoica (em preto), tem áreas ecodensas irregulares e pode ter aparência multilocular em variados tamanhos (Figura 18) (MARQUES et al., 2002; SPELL et al., 2001).

Figura 17. Avaliação ultrassonográfica com visualização de corpo lúteo hemorrágico. Imagem gerada por aparelho Mindray DP 20, com probe linear de 7,5 MHz.

Figura 18. Corpos lúteos cavitários de vacas em diestro. Imagens geradas pelos aparelhos Mindray DP 20 (A, B e C), com probe linear de 7,5 MHz, e Mindray M5 (D e E), com probe linear de 5,0 MHz.

O intervalo no qual a cavidade é visível está diretamente relacionado ao seu tamanho. Pequenas cavidades podem ser detectadas por apenas 2 ou 3 dias, enquanto cavidades muito grandes podem ser detectadas por 15 dias ou mais. As cavidades centrais são gradualmente substituídas por tecido sólido, de ecotextura similar ou maior que do resto do corpo lúteo. Também é comum encontrar corpos lúteos compactos durante o diestro, sem a cavidade central (Figura 19). A avaliação do número de corpos lúteos depois da superovulação em vacas pode ser feita no dia da coleta dos embriões. Essa informação pode, aliás, ajudar a estimar a resposta ovulatória (Figura 20). A despeito dessas variações de formas, não foram encontradas diferenças nas taxas de prenhez e concentração de progesterona circulante em animais com corpos lúteos cavitários ou compactos, avaliados em receptoras de embrião (NOGUEIRA et al., 2012) (Tabela 2).

Figura 19. Avaliação ultrassonográfica de ovários durante o diestro, com visualização de corpos lúteos compactos. Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A e B), utilizando probe linear de 8,0 MHz, e Mindray M5 (C e D), com probe linear de 5,0 MHz.

Figura 20. Imagens de avaliação ultrassonográfica de ovários de doadoras de embriões após tratamento de superovulação, com visualização de múltiplos corpos lúteos. Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A), com probe linear de 8,0 MHz, e Mindray M5 (B), com probe linear de 5,0 MHz (B).

Tabela 2. Concentração plasmática de progesterona (P4), diâmetro do corpo lúteo (CL) e porcentagem de prenhez em receptoras, de acordo com a classificação do corpo lúteo.

Dados

Corpo lúteo compacto

Corpo lúteo cavitário

Valor P

Número de animais

110

42

Progestorana (P4)(1)

(ng mL-1)

1,58 ± 1,23a

1,43 ± 0,96a

0,602

Diâmetro do corpo lúteo(1) (cm)

2,00 ± 0,29a

2,04 ± 0,34a

0,380

Prenhez(2) (%)

45,4a

42,9a

0,254

(1) Valores não diferem (P > 0,05) pelo teste de Tukey. (2) Valores não diferem (P > 0,05) pelo teste de Qui-quadrado.

Fonte: Nogueira et al. (2012).

O corpo lúteo alcança aproximadamente entre 400 mm2 e 700 mm2 de área de seção transversal, ou entre 20 mm e 30 mm de diâmetro durante o diestro. Como essa estrutura apresenta formato irregular, a medida de área é mais utilizada do que a de diâmetro. A área ou volume de tecido luteinizado determina a capacidade de produção e, consequentemente, a concentração circulante de progesterona. Observa-se correlação significativa (entre 0,68 e 0,85) da concentração de progesterona ao longo do ciclo estral com o número de células luteais e com o tamanho do corpo lúteo. Todavia, é importante salientar que a concentração circulante de progesterona depende do balanço entre sua síntese e o metabolismo hepático, de forma que certos fatores – como tipo e frequência de ingestão de alimentos, tamanho corporal e percentual de gordura na carcaça – podem limitar parcialmente a relação entre tamanho do corpo lúteo e concentração circulante de progesterona. Valores entre 2 ng mL-1 e 5 ng mL-1 são normalmente considerados suficientes para o estabelecimento de uma gestação e estão associados a corpos lúteos com padrão ecogênico e tamanho considerados normais para o diestro (VIANA et al., 2004). Ressalte-se que quanto maior a área do tecido luteal, maior a probabilidade de prenhez em receptoras de embrião bovino, em programas de TE, como pode ser observado na Figura 21.

Figura 21. Probabilidade de prenhez em receptoras de embrião em função do diâmetro do corpo lúteo (cm), avaliado no dia da TE (dia 7 pós-ovulação) (P = 0,006).

Fonte: Nogueira et al. (2012).

Diagnóstico de gestação

O interesse no diagnóstico de prenhez estimula a procura de métodos que propiciem maior precocidade, acurácia, agilidade e viabilidade aos exames, sendo uma das aplicações mais rotineiras da ultrassonografia na reprodução de bovinos. A ultrassonografia reúne praticamente todos os requisitos técnicos básicos de um bom método para diagnóstico de gestação. É segura, fornece resultados rápidos, é precoce e não é lesiva para a mãe, feto ou operador.

Existe certa controvérsia em relação à identificação da idade mais precoce para a realização do diagnóstico de prenhez com ultrassom, a ser executado de forma segura e rápida, por técnicos, em campo. Alguns trabalhos, sobretudo em vacas Bos taurus, sugerem que o diagnóstico precoce de prenhez por ultrassonografia poderia ser executado a partir dos 10 dias de gestação, com a primeira detecção de vesículas embrionárias, embora tenham salientado que o período ótimo seja a partir de 25 dias (BOYD et al., 1988; CHAFFAUX et al., 1988; KASTELIC et al., 1989, 1991). Em torno do 18º dia pós-cio, vacas com um grande corpo lúteo e útero relacionado à fase de diestro têm probabilidade maior do que 80% de estarem prenhes. Aquelas que aparentam retorno ao estro (corpo lúteo em regressão e útero com ecotextura heterogênea) têm probabilidade maior do que 90% de não estarem prenhes. Antes do 20º dia, é difícil detectar conteúdo característico de gestação no interior do útero; depois desse dia, porém, o volume do fluido intrauterino aumenta.

De acordo com a literatura (CURRAN et al., 1986; KASTELIC et al., 1988), em condições ótimas, o próprio embrião pode ser detectado, e o batimento cardíaco visualizado ao redor do 20º dia de gestação. Entre o 20º e o 22º dia, o embrião está em íntima aposição ao endométrio e envolto por uma pequena área circular de fluido (aproximadamente 3 mm a 5 mm) em animais taurinos. Porém, como resultados práticos de um estudo realizado no Brasil (BARROS, 1997; BARROS; VISINTIN, 2001) com vacas Bos indicus e ½ sangue Bos taurus x Bos indicus, só foi possível visualizar o concepto bovino aos 21 dias em apenas um de 23 exames, e nenhum diagnóstico foi possível antes dos 21 dias de gestação (com a visualização do concepto).

Ressalta-se que, neste estudo, os exames para diagnóstico de gestação antes do 25º dia de prenhez apresentaram excesso de manipulação, além de muitas dificuldades, tendo aumentado em até cinco vezes o tempo necessário para a realização de cada exame. Segundo Chaffaux et al. (1988) e Pieterse et al. (1990), a ecografia é menos precisa quando aplicada entre o 21º e o 25º dia, do que entre o 26º e o 33º dia de gestação em bovinos, aumentando a frequência de diagnósticos falsos positivos. A Figura 22 demonstra imagens de útero de novilhas zebuínas avaliadas entre o 23º e o 24º dia de gestação, que foram confirmadas como prenhes aos 30 dias, nas quais se verifica pequena quantidade de líquido no útero.

Figura 22. Avaliação ultrassonográfica de útero bovino (novilha Nelore) em fases precoces de gestação: útero com pequena quantidade de líquido aos 23 dias de gestação (seta) (A); útero com pequena quantidade de líquido aos 24 dias de gestação (B). Imagens geradas por aparelho Mindray DP 20, com probe linear de 7,5 MHz.

Depois do 24º dia de gestação, o aumento na área de seção transversal se torna evidente ao longo do corno uterino que contém o embrião e, logo a seguir, se estende ao outro corno uterino. Em condições de campo, um operador experiente e de posse de um bom equipamento deve ser capaz de detectar o embrião no 25º dia (embora isso possa ser constatado antes, aumentando a manipulação e o tempo de exame). É por isso que, na maioria das vacas zebuínas, essa é a idade mínima sugerida para a realização do exame, com segurança. O embrião localiza-se consistentemente na base do corno uterino (região mais próxima ao ovário) ou entre a base e a segunda curvatura. Nesse período, o embrião está acoplado à face dorsal do lume uterino.

Depois do 25º dia, aproximadamente, a detecção do fluido corioalantoico e a visualização da vesícula embrionária (Figura 23A) são fortemente sugestivas de prenhez, como preconizam Perry et al. (1990), segundo os quais o tempo mínimo para alcançar eficiência no diagnóstico é de 25 dias, pois é difícil estabelecer a diferença entre o fluido fisiológico intraluminal do estro e do proestro e o córion alantoide entre 18 e 21 dias. No entanto, a detecção do próprio embrião com batimento cardíaco é o método mais confiável de diagnóstico de prenhez e viabilidade do feto em fases precoces de gestação (Figuras 23C a 23H).

Figura 23. Avaliação ultrassonográfica de útero bovino em fases precoces de gestação: vesícula embrionária (A); útero com visualização de líquido aos 25 dias de prenhez (seta) (B); embrião aos 25 dias de prenhez (C); embrião aos 27 dias de prenhez (D); embrião aos 28 dias de prenhez (E); embrião aos 29 dias de prenhez (F); embrião aos 30 dias de prenhez (G); embrião aos 32 dias de prenhez (H). Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A), com probe linear de 8,0 MHz, e Mindray DP 20 (B a G), com probe linear de 7,5 MHz.

Acima do 30º ou do 32º dia de gestação, é possível visualizar claramente o embrião, que, nessa fase, se encontra mais distante (solto) do endométrio, sendo, aliás, um ótimo período para a realização de diagnóstico de gestação, com tempo de exame adequado. Com aparelhos de boa resolução, torna-se fácil a percepção dos batimentos cardíacos e, com isso, a identificação da viabilidade fetal.

Em um trabalho clássico da literatura sobre o desenvolvimento do concepto bovino entre o 20º e o 60º dia de prenhez em vacas Bos taurus (CURRAN et al., 1986), foi detectado o batimento cardíaco aos 21 dias, os membros anteriores aos 29, e os posteriores aos 31 dias. O saco alantoide foi evidenciado entre o 23º e o 27º dia em alguns animais, estando na porção média ventral do embrião por 1 ou 2 dias. Em estudos com a remoção do concepto, o saco alantoide tornou-se proeminente entre o 22º e o 23º dia, preenchendo o corno ipsi lateral entre os dias 32 e 33, e o contralateral entre os dias 35 e 37. No intervalo de tempo entre os dias 22 e 30 de gestação, o embrião apresenta a forma de C e, entre os dias 29 a 39, apresenta a forma de L. A fenda nos cascos torna-se visível entre o 42º e o 49º dia; do 42º ao 50º dia, iniciam-se os movimentos dos membros e da cabeça; e do 51º ao 55º dia, aparecem as costelas. De 29 a 33 dias, as áreas esféricas e não ecogênicas vistas de cada lado do crânio representam as cavidades oculares. O âmnio, que aparece como uma fina linha ecogênica circundando o embrião aos 30 dias, já o envolve aos 17 ou 18 dias, mas não é visível ao ultrassom. Elevações semicirculares – os placentomas – são observadas próximas ao embrião, entre o 33º e o 38º dia, sendo vistas aos 60 dias de gestação em toda a extensão do útero, mas sempre menores do que os placentomas próximos ao embrião. Esses dados estão sumarizados na Tabela 3. Na Figura 24, são apresentadas gestações de várias idades (de 36 a 55 dias), com alguns achados citados na Tabela 3.

Tabela 3. Características encontradas em bovinos, de acordo com a idade gestacional.

Estrutura/evento

Idade (dias)

Batimento cardíaco

21º

Membros anteriores

29º

Membros posteriores

31º

Alantoide

Entre o 23º e o 27º

Preenchimento do corno ipsi lateral

No 32º ou 33º

Preenchimento do corno contralateral

Entre o 35º e o 37º

Na forma de “C”

Entre o 22º e o 30º

Na forma de “L”

Entre o 29º e o 39º

Fenda nos cascos

Entre o 42º e o 49º

Início dos movimentos dos membros

Entre o 42º e o 50º

Aparecimento das costelas

Entre o 51º e o 55º

Aparecimento do âmnion circundando o embrião

No 30º

Placentomas

Entre o 33º e o 38º

Placentomas em toda a extensão do útero

No 60º

Fonte: Curran et al. (1986).

Figura 24. Gestação com várias idades: 36 dias (A); 38 dias (B); 42 dias (C); 48 dias (D); 49 dias (E); 55 dias, com visualização das costelas do feto e placentoma no útero (setas) (F). Imagens geradas pelos aparelhos Mindray DP 20 (A, B e D), com probe linear de 7,5 MHz, e Pie Medical-Falcon 100 (C, E e F), com probe linear de 8,0 MHz.

Entre as possíveis fontes de erro no diagnóstico precoce de gestação, a mais importante decorre da dificuldade de distinguir certos conteúdos uterinos, particularmente no caso de acúmulo de muco na luz uterina. Por isso, a confirmação do diagnóstico depende da identificação clara do feto e, preferencialmente, do batimento cardíaco (VIANA et al., 2004).

A morte embrionária pode ocorrer em qualquer época, durante a prenhez. Quando a morte embrionária ocorre após o 25º dia, o corpo lúteo persiste por um intervalo variável de tempo e os tecidos do concepto e os fluidos parecem não ser reabsorvidos; todavia, é possível ocorrer alguma deterioração, que resulta em “membranas flutuantes” e quantidades variadas de resíduos ecogênicos. Vacas nessas condições poderão ser diagnosticadas como prenhes se o embrião/feto não for visualizado. Quando o corpo lúteo regride, a cérvix abre-se, e a maioria do tecido do concepto e dos fluidos é perdida por expulsão.

A mensuração do feto (morfometria fetal) permite determinar sua idade e avaliar se o seu desenvolvimento é normal. Normalmente, são realizadas medidas predefinidas do feto ou de suas partes, cujos resultados devem ser comparados com tabelas de crescimento. Nos aparelhos mais modernos, as tabelas fetais permitem, a partir de uma determinada medida, calcular a idade fetal, a data provável da cobertura e a do parto. As medidas mais utilizadas são o comprimento fetal (CRL) (Figuras 24B, 24D e 24E), o diâmetro biparietal (BPD) (Figura 25) e o diâmetro do tronco (TD). Também é possível, em idades mais avançadas, avaliar partes do feto e realizar a mensuração de estruturas como os placentomas (Figura 26).

Figura 25. Avaliação da idade gestacional pelo diâmetro biparietal, conforme indicação de seta (A = 62 dias; B = 76 dias). Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A), com probe linear de 8,0 MHz, e Mindray DP 20 (B), com probe linear de 7,5 MHz.

Figura 26. Estruturas em fetos em estágios avançados de gestação: cascos (A); globo ocular (B); placentomas (C); costelas, coração e cordão umbilical (D). Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A, C e D), com probe linear de 8,0 MHz, e Mindray DP 20 (B), com probe linear de 7,5 MHz.

Sexagem fetal

Com o desenvolvimento da técnica de ultrassonografia em bovinos, aumentou a demanda por diagnóstico do sexo fetal, pois essa técnica trouxe nova perspectiva de planejamento dos rebanhos, ao propiciar a escolha, de acordo com o sexo, de maior concentração de machos em rebanhos produtores de carne ou de venda de reprodutores e fêmeas em rebanhos leiteiros. A tecnologia também se mostrou muito útil na comercialização de receptoras de embrião com prenhez de determinado sexo, na programação de formação de plantéis, entre outras utilidades.

O diagnóstico do gênero fetal é baseado na determinação da localização do tubérculo genital (TG) ou da identificação da bolsa escrotal, ou da glândula mamária, em fetos entre 55 e 120 dias de gestação (CURRAN et al.,1989). No caso do TG, essa estrutura existe nos fetos de ambos os sexos e diferencia-se em clitóris e glande do pênis nas fêmeas e nos machos, respectivamente. Nos machos, o TG é brilhante, bilobulado ao início (podendo se apresentar trilobulado ou como “tridente”, posteriormente), enquanto nas fêmeas é bi- ou trilobulado, e localiza-se ventralmente à cauda, que é monolobulada. Em ambos, é uma estrutura ecodensa e tem aparência bem particular. No início da gestação, detectada a partir do 48º dia, localiza-se sobre a linha média, entre os membros posteriores (Figura 27). Até essa idade, não é possível detectar diferenças entre fetos masculinos e femininos. A partir daí, tem início a migração do tubérculo: na fêmea, o TG migra a uma pequena distância, em sentido posterior (ventralmente à base da cauda), e, no macho, o TG migra a uma distância maior, em sentido anterior, até uma posição imediatamente posterior ao cordão umbilical (Figura 28), sendo acurada a identificação do sexo fetal com a observação do TG aos 56 dias de gestação, nos machos, e um pouco antes, nas fêmeas (CURRAN et al., 1986). Utilizando-se dessas avaliações de identificação de TG, Barros e Visintin (2001) conseguiram taxas de acertos do diagnóstico precoce dos sexos de 90,7% aos 60 dias de gestação.

Figura 27. Feto com idade inadequada para a sexagem, já que a migração do tubérculo genital (TG) ainda não está completa, apresentando-se entre os membros posteriores (seta). Imagem gerada por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe linear de 8,0 MHz.

Figura 28. Sexagem de fetos machos: cordão umbilical e presença do tubérculo genital posteriormente (A, B e C); tubérculo genital (D). Imagens geradas pelos aparelhos Mindray DP 20 (A, B e C), com probe linear de 7,5 MHz, e Aloka 500 (D), com probe linear de 5,0 MHz. PATA D = pata dianteira; PATA T = pata traseira; cordão = cordão umbilical; TG = tubérculo genital.

No plano lateral do feto, a observação de estruturas é mais fácil que nos planos frontal ou transversal. O diagnóstico do sexo de fêmeas não deve ser baseado na ausência do tubérculo em posição caudal ao umbigo, local característico do tubérculo nos machos, pois, dependendo de alguns ângulos, o TG pode não ser visto. Ademais, a cauda pode ser confundida com o TG nas fêmeas. O diagnóstico com maior acuidade do sexo fetal pode ser realizado aproximadamente entre o 55º e o 90º dia da gestação, ou mais tarde (desde que se tenha acesso ao feto para a visualização das estruturas corretas).

Em explorações mais tardias, as estruturas visualizadas são o saco escrotal e as glândulas mamárias. No macho, pode ser reconhecido um esboço escrotal presente na região inguinal a partir do 75º dia de gestação; as gônadas estão presentes dentro do saco escrotal entre o 90º e o 130º dia. Nas fêmeas, pode-se observar a imagem das glândulas mamárias e os mamilos (Figura 29D), na mesma localização e durante o mesmo estádio de observação. Durante o último período de gestação, a exploração apresenta maior dificuldade de acesso ao feto, já que o útero se desloca mais profundamente na cavidade abdominal com o avançar da gestação.

Figura 29. Sexagem de fetos fêmeas: tubérculo genital na base da cauda (seta) (A, B e C); glândula mamária e dos mamilos (D). Imagens geradas pelos aparelhos Mindray DP 20 (A, B e D), com probe linear de 7,5 MHz, e Aloka 500 (C), com probe linear de 5,0 MHz. PD = pata dianteira; PT = pata traseira; cordão = cordão umbilical; TG = tubérculo genital.

Aspiração folicular ovum pick up (OPU)

Entre as primeiras biotecnologias estudadas e utilizadas para o incremento da produtividade animal está a congelação de sêmen aliada à inseminação artificial (IA), técnica que exerceu grande pressão de seleção de animais machos. Posteriormente, a utilização das técnicas de múltiplas ovulações (Moet) e de transferência de embrião (TE) permitiu aumentar a exploração do potencial reprodutivo das fêmeas. Mais tarde, com o advento da produção in vitro (PIV) de embriões, elevou-se ao nível máximo a pressão de seleção de fêmeas. Para a realização da PIV, é preciso obter oócitos de boa qualidade, os quais devem estar em condições de ser fertilizados e prosseguirem o desenvolvimento embrionário.

O acesso aos ovários para a obtenção dos oócitos é feito com o auxílio de ultrassonografia transvaginal, técnica conhecida como “aspiração folicular guiada por ultrassonografia” (do inglês ovum pick-up, ou, de forma abreviada, OPU). Essa técnica tem inúmeras vantagens: é menos invasiva e menos traumática para os animais, além de ter alto grau de repetição, sendo que, em animais adultos, a aspiração folicular apresenta eficiência de cerca de 70% ou superior a isso (capacidade de recuperação de oócitos a partir dos folículos visualizados). Em trabalho publicado sobre OPU e PIV de embriões em vacas Nelore no Brasil (PONTES et al., 2011), foi relatada uma média de 30,84 ovócitos por vaca aspirada, sendo 23,23 ovócitos viáveis, 8,13 embriões viáveis, produzidos por sessão de aspiração, e 3,03 prenhezes, perfazendo um total de 37,26% de prenhez no dia 30, e 35,79% de prenhez no dia 60, pós-transferência. Os dados são de 656 procedimentos de aspiração folicular e dão uma boa dimensão dos resultados da técnica no País (Tabela 4).

Tabela 4. Média de dados de desempenho reprodutivo, seguida de procedimentos de OPU/PIV (n = 656), realizados em doadoras Nelore (n = 317) e distribuídos de acordo com a produção de oócitos (classificados em grupos de acordo com a produção: G1 = maior produção e G4 = menor produção).

Grupo (n)

Total de 

oócitos

Oócitos 

viáveis

Embriões 

viáveis

Gestação 

no dia 30

Gestação 

no dia 60

Perda 

embrionária

G1 n = 78

58,94 ± 2,04a

47,06 ± 1,6a

15,06 ± 0,86a

5,62 ± 0,54a

5,52 ± 0,81a

0,5 ± 0,08a

G2 n = 80

32,61 ± 0,50b

24,95 ± 0,33b

9,17 ± 0,63b

3,63 ± 0,36b

3,32 ± 0,33b

0,3 ± 0,06b

G3 n = 79

22,13 ± 0,50c

15,57 ± 0,26c

6,00 ± 0,39c

2,10 ± 0,21c

1,92 ± 0,20b

0,2 ± 0,04b

G4 n = 80

10,26 ± 0,57d

6,31 ± 0,38d

2,42 ± 0,25d

0,92 ± 0,13d

0,85 ± 0,13b

0,1 ± 0,03b

Total 

n = 317

30,84 ± 0,88

23,35 ± 0,72

8,13 ± 0,30

3,03 ± 0,15

2,91 ± 0,013

0,28 ± 0,02

Médias na coluna, seguidas de letras diferentes, diferem (P < 0,05).

Fonte: Pontes et al. (2011).

A técnica de OPU é bastante versátil, podendo ser aplicada a animais em vários estados fisiológicos. Assim, animais cíclicos, em anestro, no início de gestação, animais que não respondem aos tratamentos hormonais para superovulação (MOET) e animais considerados velhos, com algum tipo de desordem reprodutiva que os impeçam de ser utilizados em programas reprodutivos convencionais, e até mesmo animais ainda jovens e pré-púberes, passaram a ser utilizados para produzir embriões in vitro (BROGLIATTI et al., 1997). A técnica de aspiração folicular pode exercer efeito terapêutico em alguns casos de infertilidade, além de dispensar o uso de gonadotrofinas exógenas nos animais. Aspirações repetidas também são possíveis em animais gestantes durante o primeiro trimestre de gestação, pois aqueles animais também apresentam ondas de crescimento folicular semelhantes às observadas em animais não gestantes. Porém, depois do primeiro trimestre de prenhez, o acesso é dificultado, pois os ovários ficam situados na cavidade abdominal, por causa do peso do feto e das estruturas anexas.

Para a utilização da técnica de OPU, a qualidade da imagem produzida pelo transdutor é de suma importância, pois ela é utilizada para guiar a agulha de aspiração dentro do ovário até o folículo a ser aspirado. Os transdutores mais frequentemente utilizados são os setoriais e os convexos de 5,0 MHz ou 7,5 MHz, pois permitem a visualização de folículos de 2 mm de diâmetro. Transdutores lineares também podem ser adaptados para uso transvaginal. Para tanto, coloca-se uma guia para a agulha de punção na parte superior do transdutor. Todavia, sua eficiência é menor do que a dos transdutores convexos (BOLS et al., 2004; SENEDA et al., 2003). Nos procedimentos de rotina, utilizam-se agulhas de 60 cm de comprimento, com lúmen de 17 G, 18 G ou 20 G, e ângulo curto, mas há equipamentos que também permitem o uso de agulhas descartáveis de 17 G ou 18 G. O uso de agulhas descartáveis facilita a reposição ou troca de agulha durante os procedimentos. Além disso, as agulhas descartáveis são de baixo custo e têm um volume morto reduzido, o que favorece a aspiração de pequenos volumes de fluido folicular, principalmente quando são aspirados folículos pequenos. Qualquer que seja o tipo de agulha utilizado, ela deve ser a mais fina possível, para atravessar a parede vaginal e minimizar danos aos ovários.

Para que a técnica da OPU seja eficiente, é preciso que os operadores sejam muito bem treinados, diminuindo, assim, a possibilidade de causar lesão ao animal. Depois que o animal foi selecionado, contido e anestesiado (o bloqueio regional epidural baixo é suficiente), deve-se proceder ao esvaziamento do conteúdo retal; nesse momento, o ovário deve ser palpado por via transretal. Na sequência, o transdutor deve ser introduzido através da vulva – previamente lavada e higienizada – e empurrado cranialmente até próximo ao óstio cervical externo. O ovário, segurado através da parede retal, deve, então, ser pressionado junto à parede vaginal, dentro da área de visualização do ultrassom. As estruturas ovarianas serão, então, visualizadas, com detalhes consideráveis. O ovário deve ser manipulado de forma que os folículos sejam levados até a área do campo de escaneamento pelo ultrassom, onde está posicionado o cursor para a biópsia. Uma agulha vai ser, então, introduzida no canal da biópsia, que passa acima do transdutor e avança cranialmente até se chocar com a parede vaginal (BOLS et al., 1995) (Figura 30).

Figura 30. Fixação do ovário para aspiração folicular (OPU).

Ilustração: Neimar Correa Severo.

A extremidade da agulha aparece na tela como uma área hiperecoica, que produz alguma reverberação (Figura 31). A imagem da ponta da agulha pode ser vista avançando para além do transdutor, quando é empurrada através da parede vaginal. Se o alinhamento do ovário estiver correto, a agulha perfurará o folículo visualizado. Ao perfurar o folículo, aplica-se uma pressão negativa no sistema de aspiração e o conteúdo do folículo é aspirado até o tubo coletor. Usando essa técnica, podem ser realizadas múltiplas aspirações nos dois ovários.

Figura 31. Cisto folicular sendo aspirado, com visualização da agulha (A). Ovário com folículos na linha de aspiração (onde a agulha se movimentará) (B). Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A), com probe convexa de 7,5 MHz, e Aloka 500 (B), com probe convexa de 5,0 MHz.

A combinação entre pressão de vácuo e o diâmetro e o comprimento da agulha pode exercer inúmeros efeitos, tanto sobre o índice de recuperação quanto sobre a morfologia dos oócitos recuperados, e, consequentemente, pode afetar a sua capacidade de desenvolvimento (BOLS et al., 1996). O impacto mais facilmente percebido é seu efeito sobre a camada de células do cumulus que recobre os oócitos. Pressão moderada de aspiração (de 80 mmHg a 100 mmHg) com agulhas finas resulta na recuperação de maior proporção de complexos cumulus-oócitos, com mais camadas intactas de células rodeando os oócitos (BOLS et al., 1997); já pressão intensa de aspiração resulta em maior proporção de oócitos desnudos.

Em relação à frequência de aspiração, existem inúmeros e controversos trabalhos. Alguns autores preconizam que as aspirações foliculares podem ser feitas duas vezes por semana, para se obter um maior número de oócitos (CHAUBAL et al., 2006; DING et al., 2008); ademais, os índices de desenvolvimento embrionário não se alteram quando é feita uma ou duas aspirações por semana (CHAUBAL et al., 2006). No entanto, há quem sugira intervalos maiores – por exemplo, 15 dias – para as sessões de aspiração.

Caracterização ultrassonográfica de patologias de ovários

A ultrassonografia fornece uma imagem correspondente ao “corte” do órgão avaliado, possibilitando caracterizar estruturas internas no ovário. Isso torna possível diagnosticar várias patologias de ovário, mesmo em situações nas quais não há alteração de forma ou consistência do órgão.

Cistos

Segundo Nascimento e Santos (2003), dez tipos de cistos podem ser encontrados nos ovários ou a seu redor, porém o cisto folicular (ou doença ovariana cística) representa a patologia ovariana mais comum em bovinos. Tem maior prevalência no período pós-parto e em vacas de leite, mas também é bastante comum em vacas “falhadas”, ou seja, aquelas que passam mais de uma estação de monta vazias e apresentam elevação demasiada no escore de condição corporal. De acordo com a definição clássica, cisto é uma estrutura folicular anovulatória, com diâmetro superior a 25 mm, que persiste nos ovários por mais de 10 dias sem a presença de um corpo lúteo funcional, enquanto o folículo pré-ovulatório na vaca dificilmente ultrapassa os 20 mm de diâmetro (HAFEZ; HAFEZ, 2004). A etiogenia dos cistos foliculares envolve alterações no padrão de liberação de LH, que impedem a ovulação. Cistos são estruturas dinâmicas, e animais que apresentam essa patologia podem apresentar crescimento folicular e uma sucessão de folículos anovulatórios que assumem a característica cística. O tamanho do cisto é um critério que deve ser avaliado com cautela, pois animais de raças zebuínas apresentam menor diâmetro final dos folículos ovulatórios e podem apresentar cistos com diâmetro semelhante a folículos normais de raças europeias (VIANA et al., 2004).

Podem ocorrer variações na maneira como o padrão normal de desenvolvimento folicular é afetado, de forma que o aspecto ultrassonográfico dos cistos possa ser semelhante ao de folículos normais ou, ainda, apresentar graus variados de luteinização da parede (Figuras 32A a 32D), o que pode dificultar uma clara distinção entre o cisto folicular e o cisto luteínico. Como os cistos entram em atresia após um período variado de tempo, é comum que sejam observados debris celulares ou grumos de fibrina em seu interior, caracterizados ultrassonograficamente pelo aspecto turvo e pela presença de pontos ecogênicos no interior do folículo. Quando uma vaca tem cisto folicular por um longo período e durante esse período ocorre hiperestrogenismo, e, consequentemente, ninfomania, o útero é geralmente estimulado e, numa fase avançada, ocorre fadiga do miométrio e hipotrofia, desenvolvendo-se mucometra ou hidrometra.

Figura 32. Cistos foliculares em bovinos: cistos foliculares (A, B e C); ovário após a aspiração de cisto folicular (D); cisto de teca (E). Imagens geradas por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe convexa de 7,5 MHz e linear de 8,0 MHz.

Outro tipo de cisto, o cisto luteínico ou luteinizado (Figura 33), ocorre quando um folículo cresce, não ovula e ocorre luteinização das células da teca interna. Pode ser confundido com corpos lúteos, que apresentam cavidades grandes. Vacas que apresentam cistos luteinizados têm falha na ovulação; normalmente, o animal entra em anestro e, nesses casos, não há hiperestrogenismo (NASCIMENTO; SANTOS, 2003).

Figura 33. Cistos foliculares luteinizados. Imagens geradas pelos aparelhos Mindray M5 (A), com probe linear de 5 MHz, e Mindray DP 20 (B), com probe linear de 7,5 MHz.

Calcificação

Regiões de calcificação aparecem na imagem ultrassonográfica como pontos hiperecoicos (brancos), dispersos no parênquima do órgão (Figura 34). Quando presentes em grande quantidade, podem até comprometer a visualização de outras estruturas, principalmente folículos em início de crescimento. Pontos de calcificação são comuns em ovários e testículos de animais velhos, mas também podem aparecer como sequelas de traumas, como no caso de animais submetidos a várias sessões de punção folicular.

Figura 34. Calcificação em ovário de doadora em idade avançada. Imagem gerada por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe linear de 8,0 MHz.

Abcessos

Abcessos ováricos em vacas são geralmente precedidos de piometras por via ascendente, especialmente nos casos de extirpação do corpo lúteo, mas são raros, e podem também resultar da contaminação do órgão por via sistêmica. Nas áreas onde a tuberculose é doença comum, os ovários e as vias genitais são frequentemente afetados, sendo, por isso, uma doença a ser considerada no diagnóstico (NASCIMENTO; SANTOS, 2003). Na imagem ultrassonográfica, os abcessos aparecem como áreas circunscritas, de tamanho variado, e apresentam conteúdo com aspecto não homogêneo, geralmente com pontos ecogênicos em meio ao conteúdo hipoecogênico (Figura 35). Não existe um padrão por causa da variação da viscosidade do conteúdo, mas é possível observar a fluidez do conteúdo quando submetido a pressão.

Figura 35. Abcessos ovarianos. Imagens geradas pelos aparelhos Pie Medical-Falcon 100 (A), com probe linear de 6,0 MHz, e Mindray DP 20 (B e C), com probe linear de 7,5 MHz.

Patologias do útero, gestação e puerpério

Além de caracterizar os ovários, a ultrassonografia permite evidenciar as estruturas internas dos demais órgãos reprodutivos, sendo bastante útil no diagnóstico de patologias. No caso do útero, esse atributo é especialmente importante, pois a maior parte das alterações patológicas envolve o endométrio ou a presença de algum tipo de conteúdo na luz uterina. Ademais, as características do útero permitem que seja feita a infusão de meios anecoicos para a criação de contrastes, o que permite diferenciar estruturas com ecogenicidade semelhante à da parede uterina.

Características ultrassonográficas indicativas de perda embrionária

Segundo Forar et al. (1995), o concepto abrange: o embrião, nome dado ao concepto até 45 dias de gestação; feto, a partir de 45 dias; feto abortado, quando é expulso sem vida antes da data prevista para o parto; e natimorto, quando morre no momento do parto. Considerando que a morte embrionária ou fetal pode ocorrer em qualquer época da gestação, para se obter um diagnóstico seguro, é preciso que o técnico tenha uma certa experiência em exame ultrassonográfico. A morte embrionária ocorre quando a pulsação cardíaca do embrião não é mais viável; o momento da morte embrionária será, então, confirmado com a realização do exame. No decurso da perda embrionária, a quantidade de líquido diminui constantemente. Graças ao monitoramento ultrassonográfico é possível acompanhar o batimento cardíaco, constatar a ausência de desenvolvimento e a perda de integridade do feto (Figura 36) e das estruturas anexas, e também avaliar o estado do corpo lúteo, do útero e da cérvix.

Figura 36. Características ultrassonográficas indicativas de perda embrionária: útero após abortamento (A e B); fetos mortos, sem viabilidade, com alteração no aspecto normal ou cuja quantidade de líquidos fetais diminuiu (C, D e E). Imagens geradas por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe linear de 8,0 MHz (A e D) e Mindray DP 20, com probe linear de 7,5 MHz (E).

A chamada morte embrionária precoce ocorre antes do período mínimo para a realização do diagnóstico de gestação, sendo, portanto, de difícil caracterização. Nesse caso, os animais repetem cios em intervalos irregulares e não são eliminados os restos embrionários, que são reabsorvidos. Quando a morte embrionária ocorre após o período de reconhecimento da gestação, o corpo lúteo persiste por um intervalo variável de tempo (de 5 a 30 dias) e pode ocorrer a repetição de cios em intervalos irregulares, conforme relatado por Kastelic et al. (1988). Os autores observaram que vacas que perderam um embrião demoraram mais a retornar ao cio do que vacas que receberam luteolíticos. Já Kassam et al. (1987) realizaram o esmagamento das vesículas gestacionais ao redor de 43 dias de gestação em quatro animais, tendo sido observados sinais de cio em apenas uma fêmea.

No exame ultrassonográfico, os principais indicativos de morte embrionária podem ser relativos ao feto (ausência de batimento cardíaco, anormalidades morfológicas e desenvolvimento retardado) ou aos anexos fetais (perda de volume e “enrugamento” da parede uterina, fragmentação da vesícula amniótica e presença de pontos ecogênicos indicando turvação e debris celulares) (Figura 36). A quantidade de estruturas ecogênicas e flocos observada no líquido fetal vai aumentando por processos de dissolução do embrião e de suas membranas fetais. Em caso de dúvidas, recomenda-se proceder à reavaliação uma semana após a primeira suspeita diagnóstica, devendo-se observar, por exemplo, se a quantidade de líquido no interior do útero diminuiu, se a ecogenicidade aumentou, se há um feto presente e, em caso positivo, se ele está vivo, por meio da observação da pulsação cardíaca. Reconhece-se como aborto a ocorrência de morte fetal após o período embrionário. O aborto é mais fácil de ser reconhecido quando a avaliação é feita logo após a sua ocorrência (THURMOND; PICANSO, 1990).

A ultrassonografia ajuda a diagnosticar a maceração e a mumificação fetais. A presença de estruturas ósseas pode ser facilmente caracterizada pelo seu aspecto hiperecoico, aparecendo na imagem como regiões brancas e intensamente brilhantes. A maceração fetal apresenta aspecto típico de conteúdo uterino contaminado, característica que permite diferenciar a maceração da mumificação fetal, que não apresenta essa condição.

Mucometra e hidrometra

A mucometra e a hidrometra são alterações estudadas conjuntamente, já que se diferenciam apenas pelas características físicas do material acumulado. A diferença entre elas está basicamente no grau de hidratação da mucina. Caracterizam-se pelo acúmulo de líquido ou muco dentro do útero e, em ambas, pode haver contaminação bacteriana e evolução para endometrite (NASCIMENTO; SANTOS, 2003). A retenção de muco é fato relativamente frequente e está geralmente associada à presença de cistos ovarianos ou a outras situações de desequilíbrio endócrino. É comum ser encontrada em vacas submetidas à superovulação com gonadotrofinas para a coleta de embriões. O muco é anecoico e aparece na imagem como um conteúdo de volume variável, mas completamente escuro e distribuído em todo o órgão (Figura 37). Dependendo da quantidade de muco retido e do seu aspecto, a mucometra pode ser confundida com uma gestação inicial.

Figura 37. Mucometra. Imagens geradas por aparelho Pie Medical-Falcon 100, com probe linear de 8,0 MHz.

Infecções uterinas

Infecções uterinas leves (de primeiro e segundo graus), caracterizadas clinicamente apenas pela presença de pontos ou estrias de pus no muco, geralmente não causam alterações morfológicas que permitam seu diagnóstico pela ultrassonografia. Já infecções graves são normalmente associadas à presença de maior quantidade de conteúdo na luz uterina e alterações na parede do órgão. No caso da piometra, o útero encontra-se distendido, apresenta parede fina e há grande quantidade de conteúdo (Figura 38). Nesse caso, um corpo lúteo persistente pode estar presente em um dos ovários. A ecotextura do conteúdo uterino pode variar, a depender de sua densidade, mas sempre apresenta aspecto turvo, com pontos ecogênicos dispersos e que se movimentam quando o órgão é comprimido, o que cria um aspecto de flutuação (VIANA et al., 2004).

Figura 38. Piometra em vacas. Imagem gerada com aparelho Chison vet, com probe linear de 7,5 MHz (A). Imagem gerada por aparelho Mindray DP 20, com probe linear de 5,0 MHz (B).

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Capítulo 3
Ultrassonografia Doppler

João Henrique Moreira Viana

Eduardo Kenji Nunes Arashiro

Luiz Gustavo Bruno Siqueira

Miller Pereira Palhão

Introdução

A crescente importância da ultrassonografia como método diagnóstico, particularmente na medicina reprodutiva, estimulou o desenvolvimento de novos equipamentos que, aos poucos, incorporaram os avanços tecnológicos e ampliaram o leque de possibilidades de emprego dessa técnica. A tecnologia Doppler, resultado desses avanços, ajuda a identificar o movimento de células e tecidos, e também a presença e a intensidade do fluxo sanguíneo. Como a vascularização e a hemodinâmica estão relacionadas às funções fisiológicas de muitos órgãos, incluindo os do trato reprodutivo, o uso da ultrassonografia Doppler permite efetuar avaliações não apenas morfológicas, mas também funcionais, possibilitando ganhos significativos em precocidade e acurácia dos diagnósticos.

Na medicina humana, a ultrassonografia Doppler é utilizada rotineiramente na clínica médica, inclusive nas áreas de ginecologia e obstetrícia. O Doppler colorido também se tornou importante ferramenta de predição do sucesso das biotecnologias associadas à reprodução assistida, a exemplo da fertilização in vitro. Na medicina veterinária, a tecnologia Doppler já faz parte da rotina de clínicas especializadas no tratamento de animais de companhia (cães e gatos). Em grandes animais, seu uso ainda é incipiente e muitas vezes restrito à pesquisa. Contudo, trata-se de uma tecnologia com grande potencial de impacto e que pode, no futuro, fazer parte da rotina de exames em ginecologia e obstetrícia de animais de produção. Na espécie bovina, estudos recentes já vêm utilizando a ultrassonografia Doppler na avaliação da fisiologia reprodutiva e no desenvolvimento e na aplicação de biotecnologias, como a inseminação artificial em tempo fixo (IATF), a produção in vitro de embriões (Pive), a transferência de embriões (TE) e a clonagem.

Princípio de funcionamento

O efeito Doppler foi descrito em 1842 por Christian Johann Doppler. É um fenômeno natural, caracterizado pela alteração aparente entre a frequência de onda emitida e recebida quando há um deslocamento entre o emissor da onda e o receptor. Um exemplo clássico é a mudança no som do carro ou da sirene de uma ambulância enquanto se espera para atravessar uma rua. Quando não há deslocamento entre o veículo e o observador, ou seja, ambos estão parados, não há diferença entre a frequência transmitida pelo veículo e a frequência recebida pelo observador. À medida que o veículo se aproxima do observador, o som emitido pelo veículo torna-se mais agudo. Quando começa a se afastar do observador, o som fica mais grave. Isso ocorre porque, apesar da frequência sonora emitida pelo veículo ser constante, a frequência recebida pelo observador varia de acordo com o deslocamento. Essa variação entre a frequência transmitida e a recebida é denominada desvio ou frequência Doppler, e é proporcional à velocidade relativa entre o emissor da onda e o receptor.

Na ultrassonografia, o desvio Doppler é observado quando a frequência de onda emitida pelo transdutor é diferente da frequência recebida pelo transdutor depois de a onda sonora ecoar no objeto refletor, no caso, as hemácias. O desvio Doppler é proporcional à velocidade de deslocamento entre o emissor e o receptor (ou, no caso, o objeto refletor) e, dessa forma, é possível identificar e calcular a velocidade do fluxo sanguíneo. Como a frequência Doppler é obtida em quilohertz (KHz), ela é uma onda sonora audível para os seres humanos. No monitor do equipamento de ultrassonografia, o desvio Doppler pode ser apresentado de duas formas: Doppler colorido e Doppler espectral.

Doppler colorido

Como o próprio nome indica, nesse formato, o desvio Doppler é demonstrado como um espectro de uma ou duas cores, geralmente apresentadas em sobreposição à imagem ultrassonográfica convencional (modo B). As duas cores utilizadas são o vermelho e o azul, que indicam o sentido do fluxo sanguíneo. A intensidade da cor está diretamente relacionada à velocidade do fluxo sanguíneo. Além desse padrão de cores, o sinal colocado na frente do valor da velocidade (Figura 1) também indica o sentido do fluxo. No power Doppler (expressão em algumas situações traduzida como Doppler de intensidade ou energia), técnica que representa um avanço na tecnologia Doppler, os sinais coloridos são gerados levando em consideração a intensidade dos sinais recebidos pelo transdutor, e não a variação de frequência do efeito Doppler (Figura 2). Assim sendo, ao utilizar esse modo, não é possível determinar a velocidade e o sentido do fluxo sanguíneo. Em razão dessas características, o power Doppler é utilizado em situações nas quais o vaso sanguíneo a ser avaliado tem calibre reduzido e o fluxo sanguíneo esperado é muito lento (por exemplo, parênquima de órgãos, corpo lúteo, endométrio).

Figura 1. Apresentação do desvio Doppler no modo colorido, em uma imagem ultrassonográfica, em modo B, da artéria carótida. O terceiro ciclo cardíaco do gráfico foi utilizado para o cálculo da velocidade média do fluxo (Vmn), assim como dos demais parâmetros. Os resultados estão no canto superior à esquerda (PI = índice de pulsatilidade; RI = índice de resistência; Vp = velocidade no pico sistólico; EDV = velocidade diastólica final). Em destaque: ângulo de insonação (θ), formado pelo feixe de onda (linha verde) e o vaso sanguíneo (linha amarela), apresentado para calcular a velocidade do fluxo. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz, adaptada de imagens ultrassonográficas originais.

Figura 2. Apresentação do desvio Doppler no modo Power, em uma imagem ultrassonográfica, em modo B, de um corpo lúteo. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz, adaptada de imagens ultrassonográficas originais.

Doppler espectral

No Doppler espectral, o desvio Doppler é apresentado no monitor na forma de um gráfico (velocidade × tempo). Em uma artéria, o gráfico tem o formato de uma onda e representa o pulso arterial em cada ciclo cardíaco (sístole e diástole). No gráfico, é possível determinar a velocidade média do fluxo em um ciclo cardíaco ou a velocidade do fluxo em momentos específicos, como no pico sistólico e no final da diástole (Figura 3). O fluxo venoso é caracterizado pela velocidade constante, sem a presença do padrão pulsátil observado no espectro arterial (Figura 4).

Figura 3. Doppler espectral da artéria carótida mostrando dois ciclos cardíacos completos (sístole e diástole): o ponto mais alto durante a sístole é a velocidade do fluxo sanguíneo no pico sistólico (1); no final da diástole (2), observa-se a velocidade do fluxo na fase diastólica final. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz,adaptada de imagens ultrassonográficas originais.

Figura 4. Doppler espectral característico de um fluxo venoso. Não há alteração na velocidade do fluxo ao longo do tempo. Imagem gerada com aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz, adaptada de imagens ultrassonográficas originais.

Nos vasos de pequeno calibre ou tortuosos, onde não é possível determinar o ângulo de insonação, e, portanto, não é possível determinar a velocidade do fluxo, a avaliação é realizada utilizando-se os índices de pulsatilidade (PI) e de resistência (RI), que são fornecidos pelo equipamento. Esses índices são razões matemáticas entre os valores da velocidade sistólica, da diastólica e da velocidade média do ciclo cardíaco, e indicam a perfusão vascular do órgão/tecido irrigado pela artéria que está sendo avaliada. O valor dos índices (PI ou RI) e a perfusão vascular são inversamente proporcionais, ou seja, quanto maior for o valor do índice, menor o grau de perfusão vascular.

Os valores de PI e RI são definidos pelas fórmulas:

PI = (VPS - VDF)/Vm e RI = (VPS - VDF)/VPS

Em que:

VPS = velocidade no pico sistólico.

VDF = velocidade diastólica final.

Vm = velocidade média.

Alternativas para a avaliação do sinal Doppler

Na rotina de exames em animais de produção, há situações em que a avaliação do sinal Doppler pelos parâmetros clássicos (velocidade do fluxo, índices de PI e RI, etc.) não é viável, seja pela arquitetura vascular do órgão em questão, seja pela dinâmica das avaliações em campo, ou até mesmo pela maior necessidade de imobilização dos animais. Esse é o caso, por exemplo, da avaliação Doppler de folículos e corpos lúteos para a tomada de decisão em protocolos de sincronização para IATF ou seleção de receptoras. Nesses casos, a avaliação objetiva pode ser substituída por avaliação subjetiva, nas quais o técnico classifica a intensidade do sinal Doppler em escores arbitrários (Figuras 5 e 6) ou, em alguns casos, simplesmente como “presente” ou “ausente”. A avaliação subjetiva é simples e rápida, e permite a tomada de decisão imediata, sendo bastante adequada como procedimento de rotina (VIANA et al., 2013). A abordagem subjetiva requer experiência pelo avaliador, mas apresenta uma boa correlação com as medidas objetivas, tanto em folículos quanto em corpos lúteos (AREAS et al., 2012; GHETTI et al., 2012), particularmente pelo fato de ser baseada na reconstrução mental da imagem tridimensional, ao invés de utilizarem-se informações de uma única imagem ultrassonográfica.

Figura 5. Imagens de referência para avaliação subjetiva do sinal Doppler em folículos pré-ovulatórios, em uma escala crescente de 1 a 5, que equivalem, respectivamente, ao mínimo e ao máximo de sinal Doppler observado na parede folicular. As imagens foram registradas em animais diferentes, mas no mesmo momento em relação ao protocolo de sincronização de ovulação. Imagens geradas por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Figura 6. Imagens de referência para avaliação subjetiva do sinal Doppler em corpos lúteos, em uma escala crescente de 1 a 5, correspondente à variação do sinal Doppler nas estruturas. As imagens foram obtidas em animais diferentes, no 20º dia após a ovulação. Imagens geradas com aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Aplicações da ultrassonografia Doppler na reprodução de bovinos

Avaliação folicular

No folículo ovariano, os vasos sanguíneos estão presentes apenas na camada de células da teca e, a partir dessa, os nutrientes e as outras substâncias chegam até as células da granulosa por difusão. Existem diversas evidências da relação entre vascularização e função folicular, já que a vascularização influencia diretamente a composição do fluido folicular (RODGERS; IRVING-RODGERS, 2010), a produção de estradiol (PANCARCI et al., 2012) e, consequentemente, o potencial de desenvolvimento do oócito (SUTTON et al., 2003). Coerentemente, a expansão da vascularização folicular é coincidente com o crescimento do folículo ovariano e atinge um pico após a onda ovulatória de LH (ACOSTA et al., 2003). Em seres humanos, a avaliação da vascularização folicular tem sido utilizada como parâmetro preditivo do sucesso na fertilização in vitro (CHUI et al., 1997).

Na espécie bovina, também há evidências de que a vascularização influencia a viabilidade, o estabelecimento da dominância e a capacidade ovulatória dos folículos (ACOSTA et al., 2003, 2005; PANCARCI et al., 2012), assim como a probabilidade do estabelecimento de gestação depois da inseminação artificial (SIDDIQUI et al., 2009). Na rotina de campo, a avaliação da vascularização folicular pode ser utilizada, por exemplo, como critério para a seleção de animais aptos à inseminação artificial. Folículos sem sinal Doppler provavelmente estão em atresia (ACOSTA et al., 2005) e vão resultar em falhas de concepção. A evolução do fluxo, decorrente do aumento da vascularização, está relacionada à proximidade da ovulação: folículos com escores de vascularização abaixo de 3 (em uma escala de 1 a 5) não serão capazes de ovular nas próximas 6 horas (ARASHIRO et al., 2014). No caso de cistos ovarianos, a intensidade do sinal Doppler pode ser utilizada também na caracterização da presença de tecido luteal na parede folicular (RAUCH et al., 2008).

Avaliação da função luteal

O corpo lúteo (CL) é uma glândula transitória formada por células da parede folicular, logo após o processo de ovulação. O CL é uma estrutura altamente vascularizada e apresenta o maior aporte sanguíneo por unidade de tecido do corpo (ACOSTA et al., 2002). A formação de um plexo vascular adequado é importante para que o CL receba todos os precursores necessários ao desempenho de sua função, ou seja, síntese e secreção de progesterona. Durante as primeiras 96 horas da luteogênese, o fluxo sanguíneo e o volume da vascularização luteal aumentam três ou quatro vezes (ACOSTA et al., 2003). No final do ciclo estral, caso o animal não fique gestante, o CL entra em regressão. O processo de luteólise é caracterizado pela queda acentuada e abrupta dos níveis plasmáticos de progesterona, bem como pela redução gradual da massa de tecido luteal (SIQUEIRA et al., 2009). Paralelamente, a luteólise é caracterizada por um aumento agudo da vascularização nas duas primeiras horas após o tratamento luteolítico, seguido por uma diminuição significativa de 24 a 48 horas depois (ACOSTA et al., 2002). O estabelecimento da gestação requer o reconhecimento desse estado, processo pelo qual o concepto impede a luteólise pelo bloqueio da produção de prostaglandina (PGF2α) endometrial (BAZER et al., 1994). Dessa forma, a presença de um corpo lúteo funcional imediatamente após esse período de reconhecimento sugere o estabelecimento da gestação (MATSUI; MIYAMOTO, 2009).

O ato de avaliar o fluxo sanguíneo luteal foi utilizado, com sucesso, como alternativa à detecção de animais não gestantes 20 dias após a inseminação artificial (SIQUEIRA et al., 2013) (Figuras 7 e 8). Ainda que sujeito a um percentual de falsos negativos, em virtude das perdas embrionárias entre o 20º dia e o dia do diagnóstico definitivo da gestação, o uso do Doppler permite identificar corretamente os animais não gestantes cerca de 10 dias antes do diagnóstico ultrassonográfico precoce de gestação, que é realizado em torno de 30 dias após a inseminação (ou 23 dias após a transferência de embriões). Com isso, animais não gestantes podem ser ressincronizados mais rapidamente, reduzindo, assim, o intervalo de partos ou o custo de manutenção de receptoras.

Figura 7. Imagem ultrassonográfica com função Doppler colorido de um corpo lúteo no 20º dia pós-inseminação artificial, em um animal posteriormente identificado como gestante. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Figura 8. Imagem ultrassonográfica com função Doppler colorido de um corpo lúteo no 20º dia após a inseminação artificial, em um animal posteriormente identificado como não gestante. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Avaliação da gestação

Placentoma

Nos ruminantes domésticos, as trocas de nutrientes, gases e metabolitos entre a mãe e o feto ocorrem em unidades funcionais denominadas “placentomas”, formados pela interação entre os cotilédones fetais e as carúnculas maternas presentes na parede endometrial. Em bovinos, após a quarta semana de gestação, projeções vilosas crescem no córion e penetram nas carúnculas maternas. Essas projeções vilosas aumentam em número e comprimento durante os 3 meses seguintes da gestação, aumentando a superfície de contato para as trocas materno-fetais. Durante o desenvolvimento do placentoma, forma-se um leito vascular (Figuras 9 e 10), que é fundamental para o funcionamento placentário e para o desenvolvimento fetal (REYNOLDS et al., 2010).

Figura 9. Placentoma em uma gestação de 70 dias, com formato (discoide) e grau de vascularização característicos. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Figura 10. Placentoma em uma gestação de 180 dias. Em virtude da formação dos vilos coriônicos e das criptas carunculares, a distribuição dos vasos sanguíneos no placentoma é bastante característica. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Artéria uterina

As artérias uterinas são as principais artérias presentes no útero. A artéria uterina é uma ramificação da artéria umbilical, que, por sua vez, é a principal ramificação da artéria ilíaca interna. Ao longo da gestação, observam-se alterações nos padrões hemodinâmicos das artérias uterinas, para que haja uma vascularização adequada da placenta (Figura 11). À medida que a gestação avança, reduzem-se os valores dos índices de resistência e pulsatilidade e aumenta a velocidade média do fluxo sanguíneo da artéria uterina (HONNES et al., 2008; PANARACE et al., 2006).

Figura 11. Diferença no Doppler espectral da artéria uterina entre uma vaca não gestante (A) e uma gestante aos 180 dias (B). No animal gestante, os índices de pulsatilidade (PI) e resistência (RI) estão bem menores, indicando uma maior perfusão sanguínea para o útero gravídico. Essa diferença nos índices é refletida no formato da onda espectral. Imagens geradas por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz, adaptadas de imagens ultrassonográficas originais.

Feto e cordão umbilical

Com o auxílio da tecnologia Doppler, o sistema cardiovascular do feto também pode ser avaliado (Figuras 12 a 15). No entanto, na medicina veterinária, a hemodinâmica fetal ainda é uma área a ser explorada. Na medicina humana, juntamente com a avaliação do fluxo da artéria uterina, a análise do fluxo de vasos sanguíneos fetais, como a artéria cerebral média e a artéria umbilical, fornece informações importantes a respeito da oxigenação do feto. O estudo da hemodinâmica fetal em bovinos poderia ajudar a elucidar algumas anormalidades no desenvolvimento de fetos bovinos gerados por meio da clonagem ou da fertilização in vitro (por exemplo, na síndrome do bezerro grande). A avaliação do fluxo sanguíneo do cordão umbilical, por exemplo, permitiu identificar alterações associadas à placentação anormal em fetos clonados (LE CLEACH et al., 2012).

Figura 12. Feto de 60 dias. Doppler colorido da aorta. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Figura 13. Doppler colorido do coração em feto de 60 dias. É possível visualizar as quatro câmaras cardíacas. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Figura 14. Doppler colorido do cordão umbilical em feto de 72 dias. Observam-se as duas artérias umbilicais indo em direção à aorta abdominal. Imagem gerada por aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Figura 15. Doppler colorido do cordão umbilical em feto de 72 dias. É possível visualizar o cordão umbilical saindo da parede uterina e chegando à região abdominal do feto. Imagem gerada com aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz.

Referências

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Capítulo 4
Ultrassonografia testicular como recurso de diagnóstico na andrologia bovina

Eliane Vianna da Costa-e-Silva

Vanessa Lopes Dias Queiroz

Luiz Carlos Cesar Costa Filho

Bruno Xavier Ferreira

Alvaro Augusto Anunziato Dock Fortunato

Cynthia Cantagessi de Souza

Vitor Mioto Oliveira

Carmem Estefânia Serra Neto Zúccari

Introdução

A ultrassonografia pode ser usada como técnica complementar ao exame clínico de reprodutores bovinos, como auxiliar no diagnóstico de infertilidade, favorecendo e acelerando a tomada de decisões e o prognóstico de alterações do sistema reprodutivo passíveis de tratamento. Desse modo, esse recurso tecnológico deu uma nova dimensão para a andrologia em todos os seus aspectos anatomofisiológicos. Além da perspectiva clínica, o ultrassom oferece a possibilidade de avaliação do prognóstico de fertilidade e de acompanhamento das alterações do parênquima testicular, que são típicas do desenvolvimento sexual, permitindo, assim, prognosticar a precocidade sexual. Trata-se, ademais, de um método não invasivo, que pode ser empregado para determinar as medidas testiculares de forma direta e, com isso, predizer, de forma bem ágil, o volume testicular, principalmente em animais muito jovens.

Breve revisão da anatomia do genital masculino bovino

Escroto

O escroto tem a função de proteger o testículo e o epidídimo, órgãos que mantêm a função biológica. Apresenta camadas da porção externa para a interna: epiderme, derme e, estreitamente relacionada a elas, a túnica Dartus e a túnica vaginal parietal.

Entre a túnica vaginal parietal e a visceral encontra-se a cavidade do processo vaginal e, logo depois, a túnica albugínea, que se relaciona diretamente com o parênquima testicular (Figura 1).

Figura 1. Corte cranial do escroto do touro.

Ilustração: Neimar Corrêa Severo.

Testículos

Os testículos apresentam formações conjuntivas – albugínea, mediastino e septos conjuntivos –, que organizam os túbulos seminíferos.

Os túbulos seminíferos alojam-se em lóbulos formados pelas formações conjuntivas, em número de dois ou três. Dentro deles estão as células germinativas (espermatogônias A, intermediária e B, espermatócitos I, espermatócitos II, espermátides e espermatozoides) e as células de Sertoli. Externamente, estão as células mioides.

As células de Sertoli formam a estrutura epitelial dos túbulos seminíferos e unem-se umas às outras por meio das gap junctions. Entre elas alojam-se as células germinativas.

No estroma, externamente aos túbulos seminíferos, encontram-se vasos, nervos e as células intersticiais ou de Leydig.

Vias intratesticulares

Os túbulos seminíferos terminam em tubos retos, que chegam até a rete testis (emaranhado de canalículos no mediastino), os quais, por sua vez, unem-se em ductos eferentes, que formarão a cabeça do epidídimo.

Epidídimo

Os túbulos seminíferos terminam em tubos retos, que deságuam na rete testis, um emaranhado de canalículos presentes no mediastino; esses, por seu turno, juntam-se, formando de 8 a12 ductos eferentes, que compõem a cabeça do epidídimo.

O corpo do epidídimo origina-se da fusão dos ductos eferentes. É o ducto epididimário propriamente dito. Ventralmente ao testículo, o corpo do epidídimo sofre uma dilatação e passa a ser chamado de “cauda do epidídimo”.

Os ductos eferentes são histologicamente revestidos por epitélio colunar pseudoestratificado cilíndrico. Esses cílios ajudam a remover o espermatozoide ao longo do epidídimo. Além dessas estruturas, existem células com microvilosidades – relacionadas intimamente com o processo de reabsorção, que é mais intenso na cabeça do epidídimo – e células com atividade secretora ao longo do epidídimo.

Baseado no perfil histológico e funcional do epidídimo, alguns autores propõem a subdivisão das regiões do epidídimo em 6 a 14 partes, associadas funcionalmente ao processo de maturação espermática (AMANN, 1987, 1988; DACHEUX et al., 2006; GOYAL, 1985).

Ducto deferente e ampolas

A partir da cauda do epidídimo, o ducto deferente retorna medianamente, paralelamente ao corpo epididimário no sentido dorsal, alcança o interior do cordão espermático, atravessa o canal inguinal e finalmente atinge a cavidade peritoneal e pélvica, onde se dilata, formando as ampolas.

Ducto ejaculador

O ducto ejaculador é a porção onde as ampolas unem-se à uretra, depois de receberem os ductos da glândula vesicular. Tem pouca importância fisiológica.

Uretra

A uretra é comum ao sistema urinário. Divide-se em uretra pélvica e uretra peniana, as quais estão separadas por um bulbo presente na raiz do pênis, o qual apresenta tecido erétil altamente desenvolvido. A região na qual os ductos ejaculadores ou os excretores e glandulares escoam é chamada de “colículo seminal”.

Glândulas acessórias

O bovino apresenta todas as glândulas acessórias (Figura 2), embora as glândulas vesiculares sejam mais ativas.

Figura 2. Estruturas anatômicas do trato genital, posicionadas na região pélvica do touro.

Ilustração: Neimar Corrêa Severo.

Glândulas vesiculares

O par de glândulas vesiculares é palpável pela via transretal e relacionam-se ventralmente ao reto e dorsalmente à bexiga. São compactas e lobuladas, têm de 10 cm a 12 cm de comprimento no bovino adulto, mas são menores nos animais jovens.

Próstata

A próstata é uma glândula ímpar, difusa nos bovinos. Apresenta um corpo prostático, com cerca de 3,5 cm a 4 cm de largura. Os ductos prostáticos abrem-se em fileira disposta caudalmente ao colículo seminal.

Glândulas bulbouretrais ou de cowper

As glândulas bulbouretrais são um órgão par. Não são palpáveis em ruminantes, já que são muito pequenas e ficam praticamente ocultas pelo músculo bulboesponjoso.

Pênis

O pênis é um tecido fibroelástico, que apresenta espaços cavernosos pequenos, com exceção nos pedúnculos e na curvatura distal da flexura sigmoide. Divide-se em raiz, corpo e glande. É formado por três corpos cilíndricos de tecido erétil e a porção peniana da uretra. Os corpos cavernosos originam-se, em par, de pedúnculos do arco isquiático; estendem-se para o ápice do pênis, mais ou menos como um único corpo. Apresentam uma galeria de vasos sinusoides. O corpo esponjoso, que circunda a uretra, é uma continuação do tecido erétil do bulboesponjoso peniano da raiz do pênis, que se estende por todo o órgão, originando a glande. Separando os corpos esponjoso e cavernoso, há uma camada de tecido conjuntivo denominada “septopectinoforme”. Músculos lisos retratores do pênis são especialmente desenvolvidos em ruminantes; se contraídos, mantêm o pênis recolhido. A glande é composta por corpo cavernoso e é pouco desenvolvida no touro (Figura 3).

Figura 3. Corte transversal da porção distal do corpo do pênis do touro.

Ilustração: Neimar Corrêa Severo

A ultrassonografia como método auxiliar na clínica andrológica bovina

O transdutor linear nas frequências de 3,5 MHz, 5,0 MHz ou 7,5 MHz é utilizado na avaliação clínica da genitália do macho. A imagem ultrassonográfica ótima dos testículos, que é um órgão superficial, pode mostrar melhor resultado quando se utiliza frequência de 5 MHz a 7,5 MHz, pois frequências baixas não fornecem alta qualidade de resolução. O ultrassom com Doppler pode ser empregado para avaliar, com melhor acuidade, a integridade do plexo pampiniforme.

Para a realização do exame ultrassonográfico dos testículos, é preciso que ambos sejam contidos, posicionando-se os dedos polegar e indicador na altura do cordão espermático. A probe deve ser inicialmente posicionada no plano longitudinal-lateral e transversocaudal; dessa forma, obtém-se a imagem do parênquima testicular (Figura 4).

Figura 4. Ultrassonografia testicular: posicionamento da probe no plano longitudinal-lateral do testículo (A); visão obtida de posicionamento da probe no plano longitudinal-lateral testicular em bovinos jovens (B): mediastino (1), septoescrotal (2). Imagem gerada com aparelho Chison D500vet (B) e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Foto: Marcelo Fontes Pereira

As estruturas anatômicas do sistema genital apresentam-se moderadamente ecogênicas. Podem ser observados filamentos tubulares anecoicos no lúmen do corpo do epidídimo e das ampolas.

O parênquima testicular de bovinos adultos é moderadamente ecogênico e homogêneo, enquanto o dos animais pré-púberes apresenta baixa ecogenicidade e é heterogêneo. Essa diferença de ecogenicidade observada nos testículos, em fases distintas de maturação sexual, é de suma importância clínica, visto que alterações na ecogenicidade testicular podem ter interpretações diferentes, dependendo da fase do desenvolvimento sexual em que o animal se encontra.

As túnicas do testículo são visualizadas na imagem computadorizada, porém não são distinguíveis entre si, a não ser que haja fluido entre elas. Observa-se uma linha ecogênica hiperecoica, que separa o escroto do parênquima. A presença de até 2 mm de fluido entre as túnicas é um achado normal. Outra estrutura testicular facilmente detectável é o mediastino (Figura 4B), que corresponde a uma organização linear de 5 mm de largura. É hiperecoico quando visto no plano longitudinal. Já sob o ponto de vista transversal, o mediastino é observado na forma de um ponto ecogênico no centro do parênquima testicular. Em animais jovens, a espessura do mediastino e sua ecogenicidade aumentam entre a puberdade e a maturidade sexual, tendendo a diminuir novamente, mais tarde.

O ultrassom permite diagnosticar lesões do parênquima testicular que não sejam palpáveis ao exame clínico, ou seja, esse tipo de avaliação é uma modalidade de diagnóstico mais sensível do que a palpação isolada. Há várias patologias que são passíveis de ser diagnosticadas através de imagens ultrassonográficas dos testículos, tais como ruptura traumática, presença de corpos estranhos, calcificações, trauma pós-cirúrgico, periorquite unilateral, mesotelioma, lesões geriátricas e hidrocele (POWE et al.,1988).

Apesar de ser uma ferramenta valiosa, ainda são escassas as informações sobre o uso da ultrassonografia no diagnóstico de afecção testicular e escrotal em bovinos. Numa avaliação ultrassonográfica realizada por Abu-Seida (2012), em oito touros que apresentavam edema escrotal, foram registradas as seguintes afecções: rompimento de uretra, hipoplasia testicular, neoplasia maligna das células de Sertoli, hidrocele e hérnia escrotal. No caso de ruptura de uretra, a imagem do escroto apresentou-se hiperecoica, as dos testículos apresentaram ecogenicidade normal, e a do tecido circundante, áreas anecoicas difusas. A hipoplasia mostrou ecogenicidade diminuída, enquanto a rete testis foi mais ecogênica do que o normal. Os testículos neoplásicos demonstraram várias regiões anecoicas, a presença de massas hiperecoicas e até mesmo áreas de ecogenicidade normal. Em relação à hidrocele, ambos os testículos apresentaram ecogenicidade normal, porém, na cavidade vaginal do escroto, havia líquido, o que tornou a imagem anecoica. Na ultrassonografia da hérnia escrotal, esses autores observaram pontos hiperecoicos, juntamente com um testículo altamente ecogênico. Assim, esses resultados demonstram que o exame ultrassonográfico é uma boa ferramenta para fazer o diagnóstico diferencial de variadas afecções que resultam em edema escrotal em touros.

A orquite, vista através da imagem computadorizada, revela ecotextura heterogênea na fase aguda, e, com o passar do tempo, dá indicações de fibrose ou mineralização, caracterizando um aumento de ecogenicidade (KASTELIC; BRITO, 2012). Já na palpação, é possível apenas observar os sinais cardinais da inflamação (dor, rubor, aumento da temperatura, edema). Outra mudança comum é a degeneração testicular, caracterizada pela diminuição do tamanho e da resistência dos testículos na palpação, e uma elevação da ecogenicidade, decorrente da fibrose, na imagem ultrassonográfica. Já a hipoplasia testicular – diminuição congênita no tamanho de um (unilateral) ou ambos (bilateral) os testículos – mostra-se através de uma imagem hipoecoica.

As túnicas do testículo são visualizadas na imagem computadorizada, porém não são distinguíveis entre si, a não ser que haja alguma anormalidade, como na ocorrência da hematocele ou hidrocele. Nesse caso, resultará numa separação visível das túnicas testiculares visceral e parietal com o fluido, que vai se apresentar com diferentes ecodensidades: hiperecoico, se o material for purulento ou contiver sangue, e anecoico, se for um transudato.

Os achados de pontos hiperecoicos no parênquima testicular têm gerado interpretação polêmica na literatura. Em animais adultos, a associação com áreas de fibrose é óbvia. Diversas variações são observadas: múltiplos pequenos focos difundidos por todo o parênquima; únicos ou múltiplos focos maiores limitados a áreas específicas; ou, então, pequenos focos múltiplos na região dos túbulos retos, ao redor do mediastino. Na imagem do ultrassom, também são passíveis de observação lesões com padrão radial que são aparentemente associadas à fibrose de túbulos seminíferos individuais inteiros, desde a origem até a inserção com a rede testicular. A diversidade de formas das apresentações da fibrose testicular na ultrassonografia (Figura 5) sugere que essa tenha várias etiologias, embora a patogênese dessas lesões ainda não tenha sido elucidada. No entanto, em animais jovens, a observação de pontos hiperecoicos não deve ser associada a fibrose, por se tratar de uma alteração temporária, que desaparece ao longo do desenvolvimento sexual do animal, mais precisamente surgindo na pré-puberdade e desaparecendo quando o animal atinge a puberdade (Figura 6).

Figura 5. Ultrassonografia testicular: testículo normal de reprodutor Nelore, no qual se observam: indicado pela seta negra, a rete testis, que se registra como uma linha hiperecoica ao centro da imagem (A); fibrose testicular no testículo direito de touro Nelore, posicionado transversalmente ao corpo do animal e proximal à região abdominal, em decorrência de cordão espermático mais curto (B). Imagens geradas com aparelho Chison D500vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Figura 6. Imagem ultrassonográfica transversal do testículo direito de um mesmo animal, em diferentes etapas da maturidade sexual, evidenciando mudanças fisiológicas do parênquima testicular, típicas da puberdade. As imagens foram registradas em coletas sequenciais, realizadas a intervalos de 3 meses: julho (A), outubro (B) e janeiro do ano subsequente (C). Imagens geradas com aparelho Chison D500vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Além de a avaliação ultrassonográfica ser muito útil no diagnóstico de patologias testiculares, ela pode ser usada como método auxiliar no exame andrológico, uma vez que a avaliação da ecotextura testicular pode estimar a qualidade espermática e a determinar a precocidade sexual. Do ponto de vista clínico, a avaliação por ultrassom em testículos de bovinos fornece dados que aprimoram a avaliação andrológica, já que possibilita a caracterização da morfologia e a correlação das imagens com o perímetro, o peso e o volume testicular. Há relação entre a ecotextura testicular de animais adultos e a porcentagem de alterações morfológicas espermáticas nos bovinos. Quanto maior for a ecotextura, menor será a porcentagem de patologias espermáticas. A queda na produção e na qualidade seminal de touros Bos taurus submetidos à insulação escrotal pode ser correlacionada com a ecotextura testicular; nesse caso, a perda da ecodensidade testicular pode se correlacionar com o surgimento de processos degenerativos no órgão.

Em conformidade com Gabor et al. (1998), a ecotextura testicular em touros da raça Holandesa apresentou altas correlações com a proporção de espermatozoides vivos e o número de espermatozoides ejaculados (r = -0,48 e -0,70, respectivamente). Em um modelo de regressão, esses pesquisadores relataram que a ecotextura testicular foi responsável por 24% da variação observada na proporção de espermatozoides vivos e por 49% da variação observada no número de espermatozoides ejaculados, indicando que a ultrassonografia testicular possui um considerável potencial para a avaliação da função testicular no touro.

Outra patologia testicular que pode ser encontrada no exame ultrassonográfico é a presença de cistos. Na Figura 7, pode ser observada a imagem de dois cistos no parênquima testicular de um macho Nelore de 24 meses de idade.

Figura 7. Testículo em macho Nelore de 24 meses de idade, apresentando cistos de cerca de 2 cm de diâmetro. Imagem gerada com aparelho Chison D500vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Tumores também podem ser encontrados em exames ultrassonográficos. Na Figura 8, pode ser observada uma pequena massa no parênquima do testículo de um touro Nelore aos 13 meses de idade (Figura 8A), e, posteriormente, aos 16 meses, foi observado um aumento dessa massa tumoral, com diâmetro de cerca de 4 cm (Figura 8B).

Figura 8. Neoplasia testicular: com o posicionamento da probe no plano longitudinal-lateral do testículo esquerdo, observa-se alteração da imagem, demonstrando uma massa já palpável ao exame clínico, com diâmetro de 2 cm (bovino, macho, Nelore, 12 meses de idade, 266,5 kg, perímetro escrotal de 23 cm) (A); visão obtida por meio do posicionamento da probe no plano longitudinal-lateral testicular direito, onde se pode notar uma massa tumoral com diâmetro ampliado, com cerca de 4 cm, palpável ao exame clínico (o mesmo animal, aos 15 meses, com 304 kg e perímetro escrotal de 25,5 cm) (B). Imagens geradas com aparelho Chison D500vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Ultrassonografia como recurso de identificação da precocidade sexual

A imagem computadorizada tanto permite avaliar o parênquima testicular quanto acompanhar toda a sua evolução: em bovinos, entre o nascimento e aproximadamente 15 semanas de idade, há um aumento em unidades de pixel no parênquima testicular, provavelmente por reflexo da proliferação celular, que normalmente ocorre nesse período, em decorrência do amadurecimento testicular e da multiplicação das células germinativas em animais jovens. No entanto, a partir dessa idade, é observado decréscimo na quantidade de pixels nas imagens ultrassonográficas, que pode ser associado ao aumento correspondente no volume dos túbulos seminíferos e à presença de fluidos, decorrentes do início das alterações fisiológicas pertinentes à puberdade (BRITO et al., 2004).

Chandolia et al. (1997) estudaram o desenvolvimento testicular, em intervalos de 2 semanas, de bovinos de origem taurina, com idades compreendidas entre a 2ª e a 46ª semana. As imagens da ultrassonografia testicular demonstraram aumento da ecogenicidade testicular com o passar da idade, refletindo, inicialmente, a proliferação celular (divisão das espermatogônias e formação de células maduras da espermatogênese), seguida do aumento da densidade das células que darão origem aos espermatozoides. Ainda segundo esses autores, foi possível identificar, através da ecogenicidade, o momento em que os animais atingiram a puberdade, caracterizado pelo instante em que os testículos atingiram a circunferência de 28 cm.

Da mesma forma, Aravindakshan et al. (2000) estudaram a ecogenicidade testicular de 20 touros mestiços da 2ª à 45ª semana de idade, e observaram que, do nascimento até a 16ª semana, houve aumento da ecogenicidade, que foi atribuído à proliferação celular. Entre a 16ª e a 24ª semana, observaram queda na ecogenicidade, atribuída ao aumento fisiológico de volume dos túbulos seminíferos nessa fase. Depois da 24ª semana, a ecogenicidade novamente se mostrou elevada, explicada pela divisão das espermatogônias e pela maior quantidade de células maduras na espermatogênese. Entre os 20 touros estudados, sete tornaram-se púberes precocemente e demonstraram, através da ultrassonografia, maior ecogenicidade testicular em comparação com os tardios, reforçando a importância dessa técnica na identificação da precocidade sexual.

O efeito da condição nutricional pode antecipar essa curva de variação da ecotextura testicular, compatível com a antecipação da puberdade. Brito et al. (2012) estudaram touros de corte (n = 152) com a idade de 14 a 26 semanas até 70 a 74 semanas, com o objetivo de avaliar a intensidade de pixels na ecografia testicular durante o desenvolvimento sexual. Os resultados destacaram que a ecogenicidade começou a se elevar entre a 12ª e a 16ª semana anteriores à chegada da puberdade e demostraram valores máximos 4 semanas antes dela. O aumento mais acentuado da ecogenicidade testicular ocorreu entre a 20ª e a 46ª semana de idade, embora, nos grupos de touros com melhor suplementação nutricional, a intensidade de pixel tenha se revelado superior em animais mais jovens e os valores máximos tenham sido atingidos na 34ª semana. Dessa forma, esses achados revelam que uma determinada fase do desenvolvimento do parênquima testicular deve ser atingida antes mesmo do início da puberdade, e a composição parenquimal permaneceu homogênea após a puberdade. Essas modificações na ecogenicidade testicular ocorreram concomitantemente com as alterações visualizadas na avaliação histológica dos testículos dos animais pré-púberes, sugerindo que possam estar relacionadas à diferenciação das células de Sertoli, ao aumento do diâmetro dos túbulos seminíferos, à formação da barreira hematotesticular e ao aumento de tamanho do lúmen.

Epidídimos

Os registros ultrassonográficos são muito importantes para visualizar alterações do tipo granuloma espermático na cabeça do epidídimo, bem como obstruções ou fibroses.

Os registros ultrassonográficos do epidídimo são realizados com a probe posicionada diretamente sobre o órgão, na porção medial dos testículos, ou durante os exames testiculares, com a probe posicionada lateralmente (Figura 9). O corpo do epidídimo normal é pouco visível, refletindo-se no plano transversocaudal como uma linha hiperecoica na porção medial entre os testículos; em animais adultos, algumas vezes pode ser vista uma extensão longitudinal anecoica central, refletindo uma área tubular. Quando muito extensa, isso pode se dever à espermostase. Áreas hiperecoicas pontuais ou difusas na cabeça do epidídimo podem refletir a formação de granulomas espermáticos ou obstruções dos ductos eferentes.

Figura 9. Alterações ultrassonográficas do epidídimo: touro Nelore com dilatação do corpo do epidídimo, com posicionamento da probe transversomedial (A); touro Nelore com dilatação do corpo do epidídimo, com posicionamento da probe longitudinal-medial (B); cauda do epidídimo direito de touro Nelore desprendida do testículo (C). Imagens geradas com aparelho Chison D500vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Na epididimite – inflamação que mais frequentemente afeta a porção caudal –, os valores de pixel mostram-se diminuídos, e a aparência heterogênea é observada quando se apresenta na forma crônica.

Ampolas

As imagens ultrassonográficas das ampolas normais indicam uma estrutura tubular com o lúmen hipoecoico e as bordas como linha hiperecoicas (Figura 10).

Figura 10. Imagens ultrassonográficas da ampola do ducto deferente de touro: ampola de touro Nelore refletindo uma área luminal anecoica e as bordas hiperecoicas (A); ampola de touro Hereford refletindo uma área luminal anecoica e as bordas hiperecoicas (B). Imagens geradas com aparelho Mindray DP 220vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Vesículas

As imagens das vesículas pela ultrassonografia são normalmente hipoecoicas, mas a ecogenicidade é aumentada quando essas glândulas apresentam respostas inflamatórias (Figura 11). A vesiculite é mais frequente em animais jovens e apresenta-se hiperecoica quando visualizada na imagem ultrassonográfica.

Figura 11. Vesículas seminais de touros: vesícula direita de touro Hereford adulto (A); vesícula esquerda de touro Hereford adulto (B); vesícula direita de touro Nelore adulto (C); vesícula esquerda de touro Nelore adulto (D). Imagens geradas com aparelho Mindray DP 220vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Próstata

A porção disseminada da próstata apresenta-se como uma estrutura hiperecoica localizada entre o lúmen uretral e o músculo uretral (Figura 12). O corpo e a porção disseminada da próstata apresentam ecogenicidade similar.

Figura 12. Próstata de touros: próstata de touro Hereford adulto (A) e próstata de touro Nelore jovem (B). Imagens geradas com aparelho Mindray DP 220vet e sonda linear de 5,0 MHz de frequência.

Referências

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Capítulo 5
Tecnologias emergentes na ultrassonografia do trato reprodutivo

Luiz Francisco Machado Pfeifer

João Henrique Moreira Viana

Luiz Gustavo Bruno Siqueira

Eduardo Kenji Nunes Arashiro

Introdução

A crescente importância da ultrassonografia como método diagnóstico, particularmente na medicina reprodutiva, estimulou o desenvolvimento de equipamentos mais modernos que, aos poucos, incorporaram os avanços tecnológicos e ampliaram as possibilidades de uso daquela técnica.

As melhorias nesses equipamentos são facilmente detectáveis: na arquitetura e na ergonomia, na portabilidade, no uso de fontes internas de energia (baterias recarregáveis), no tamanho, na resolução e no tipo dos monitores, e também no desenho das probes (Figura 1). Particularmente importantes foram os avanços relacionados à eletrônica, que possibilitaram a incorporação, nos equipamentos de ultrassonografia, de recursos já comuns em equipamentos de informática, como: telas de LCD e touch screen, discos internos de memória de alta capacidade e interfaces externas, por meio de portas USB. Esses avanços resultaram em facilidade na execução dos exames e melhoria da qualidade das imagens geradas, recursos que deram mais precisão aos diagnósticos e à documentação dos achados, contribuindo de forma decisiva para a incorporação da ultrassonografia à rotina dos exames ginecológicos. Ademais, essas tecnologias instigaram novas abordagens na ultrassonografia reprodutiva, para fins de estudo e diagnóstico.

Figura 1. Evolução tecnológica em equipamentos de ultrassonografia, representada por equipamentos de duas gerações (1998 e 2008): Scanner 200, Pie-Medical e Holanda (A, C, E); MyLab 30, Esaote e Itália (B, D, F); design, layout, tipo e tamanho do monitor (A, B); probes (setorial mecânica vs. microconvexa eletrônica) (C, D); portas de saída (vídeo vs. USB/Ethernet) (E, F).

Fotos: João Henrique Moreira Viana

Neste capítulo, serão analisadas algumas dessas novas tecnologias: a análise computacional de imagens, a ultrassonografia de alta resolução, a ultrassonografia Doppler e a ultrassonografia tridimensional. Em todos os casos, trata-se de procedimentos ainda em desenvolvimento, mas com grande impacto potencial, e que, no futuro, poderão ser incorporados às rotinas de exames em ginecologia e obstetrícia veterinárias.

Ultrassom biomicroscópio (UBM)

A resolução de uma imagem é definida pela capacidade de tornar dois pontos distintos, ou seja, quanto maior for a resolução de uma imagem, maior será o nível de detalhamento. No caso das imagens ultrassonográficas, a resolução é definida principalmente pelo comprimento de onda utilizado. Estruturas (pontos) separadas por uma distância inferior à do comprimento de onda não podem ser distinguidas na imagem. Consequentemente, quanto maior a frequência, maior a resolução obtida.

A maioria dos equipamentos de ultrassonografia disponíveis para uso na avaliação reprodutiva de animais domésticos, incluindo bovinos, possuem probes em que a frequência varia de 3 MHz a 9 MHz. Essa frequência é adequada para uma variedade de usos clínicos e para a avaliação ginecológica de rotina, incluindo o diagnóstico e o monitoramento de gestações, a identificação do sexo fetal, a avaliação de patologias do sistema genital, da função luteal e da dinâmica do crescimento em folículos ovarianos com diâmetro ≥ 2 mm.

Existem situações, contudo, em que essa resolução não é suficiente. É o caso, por exemplo, da avaliação do crescimento folicular em algumas espécies de laboratório. O camundongo é um importante modelo experimental em diversas áreas da biologia, inclusive na reprodução, mas apresenta folículos ovulatórios de difícil visualização, já que seu diâmetro é muito pequeno, entre 400 μm e 600 μm (CAMPOS-JUNIOR et al., 2011). Outro caso que exemplifica essa dificuldade está na avaliação da dinâmica folicular em bovinos no início da fase antral. O antro folicular é formado quando o folículo em crescimento atinge aproximadamente 200 μm, porém os aparelhos convencionais só permitem a visualização do antro em folículos que estão na fase de emergência das ondas de crescimento (ADAMS et al., 2008; SINGH et al., 2003).

Para contornar essas limitações, uma nova tecnologia de geração de imagens ultrassonográficas, com uma resolução comparável à de uma lupa estereomicroscópica, foi desenvolvida no início da primeira década de 2000 (Visual Sonics Inc., Toronto, Canadá). Conhecida como ultrassom biomicroscópio (UBM), a resolução desses aparelhos é de 30 μm a 50 μm (abaixo do poder de resolução do olho humano, que é de aproximadamente 200 μm), o que permite o estudo de estruturas ovarianas em tempo real com resolução próxima à histológica.

O transdutor do UBM utiliza um único cristal piezoelétrico para a emissão de ondas sonoras de altíssima frequência (de 20 MHz a 70 MHz), o que lhe permite gerar imagens com alto poder de resolução. Entretanto, como existe uma relação inversa entre frequência e poder de penetração da onda ultrassonográfica, essa tecnologia implica a geração de imagens de uma pequena porção dos tecidos (aproximadamente 10 mm com um transdutor de 30 MHz, e 5 mm com 50 MHz), além de um baixo frame-rate (8 frames seg-1) (JAISWAL et al., 2009; SINGH et al., 2003). Isso não tem maiores implicações quando se pretende avaliar estruturas ovarianas em animais de laboratório (camundongos). Em bovinos, contudo, apenas uma porção do ovário pode ser visualizada em cada imagem. Ainda assim, a alta resolução e o grau de detalhamento das imagens abre um grande número de possibilidades de aplicação, particularmente na pesquisa da fisiologia ovariana.

Já foi demonstrada a possibilidade do uso do UBM na avaliação de ovários bovinos in vivo, tendo sido possível até mesmo visualizar estruturas ecogênicas inclusas em folículos antrais, que supostamente seriam complexos cumulus-oócito (CCOs) (PFEIFER et al., 2012), conforme demonstrado na Figura 2. Resultados obtidos por meio de ultrassonografia biomicroscópica in vivo em bovinos demonstraram ser possível a identificação de folículos antrais com apenas 0,4 mm de diâmetro. Além disso, o uso do UBM permitiu a detecção de um número 2,76 vezes maior de folículos do que a ultrassonografia B-mode convencional em ovários de vacas e novilhas (PFEIFER et al., 2012).

Figura 2. Imagens de ovários bovinos geradas por ultrassom biomicroscópio. Folículos antrais de 2,6 mm (esquerda) e 2,3 mm (direita) de diâmetro: a parede folicular (linha branca) pode ser claramente distinguida do estroma ao redor do folículo (imagem gerada por aparelho Vevo 660, Visual Sonics Inc., utilizando probe transvaginal convexa de 40 MHz) (A). Imagem de ultrassom biomicroscópico de um folículo de 1,76 mm de diâmetro demonstrando uma área ecogênica dentro do antro (seta), que se acredita ser o complexo cumulus-oócito (CCO) (B). Imagem do CCO ampliada (C). Imagens geradas com aparelho Vevo 660, Visual Sonics Inc., utilizando probe transvaginal convexa de 25 MHz (B e C).

A habilidade de monitorar sequencialmente o desenvolvimento de pequenos folículos antrais e CCOs contidos nesses folículos pode resultar em importante avanço no entendimento da fisiologia ovariana e da competência oocitária. Em virtude da alta resolução dos equipamentos biomicroscópicos e da possibilidade do monitoramento in vivo de folículos com diâmetro de 500 µm a 1,0 mm, estudos já estão sendo conduzidos visando à caracterização da dinâmica de desenvolvimento folicular nessa fase, além de análises computacionais da parede e do antro nas imagens obtidas.

Análise computacional de imagens

Depois de feito o exame ultrassonográfico convencional, podem-se avaliar objetivamente as características morfológicas das estruturas visualizadas na imagem bidimensional, utilizando, caso necessário, ferramentas de mensuração dos aparelhos para o cálculo de comprimento, circunferência, área e volume. Subjetivamente, pode-se também classificar as estruturas de acordo com sua ecogenicidade (de anecoico a hiperecoico), considerando como padrão de referência imagens ou partes de imagens consideradas representativas do tecido. Como toda avaliação subjetiva, essa classificação é pouco sensível e passível de erros.

Imagens de ultrassom são compostas de centenas de milhares de pixels, e a intensidade de brilho de cada um desses pixels pode ser representada numericamente em uma escala de 256 tonalidades de cinza (0 = preto; 255 = branco). A observação visual, contudo, não possibilita uma diferenciação confiável de tecidos de diferentes densidades (ecotextura), pois o olho humano somente é capaz de distinguir entre 18 e 20 tonalidades de cinza (PIERSON; ADAMS, 1995). A alternativa, nesse caso, é quantificar o brilho desses pixels por meio de softwares específicos, processo conhecido como análise computacional de imagens. Essa técnica fornece informações precisas e objetivas sobre a ecotextura de um determinado tecido e, consequentemente, permite inferências sobre a estrutura histológica e seu possível estado funcional (SINGH et al., 2003). A análise computacional elimina a subjetividade das análises visuais e aumenta a confiabilidade dos diagnósticos baseados no padrão de densidade (ecotextura) das imagens ultrassonográficas.

Para a realização da análise computacional, é necessário, antes de tudo, selecionar a região da imagem que será avaliada. O software captura o campo selecionado, calcula a intensidade de brilho dos pixels e converte os dados em uma matriz com os valores numéricos de cada pixel (SIQUEIRA et al., 2009). Como variáveis de análise, podem ser utilizados dois parâmetros: 1) o valor médio dos pixels (intensidade média de brilho na região analisada); e 2) a heterogeneidade dos pixels (desvio-padrão do valor médio, que representa o grau de variação dos pixels componentes da imagem) (SINGH et al., 2003). Além dos valores de média e heterogeneidade, a distribuição dos dados pode ser representada na forma de um histograma (Figura 3).

Figura 3. Análise computacional de imagem de corpo lúteo em bovinos. Seleção de imagem representativa da estrutura (A); seleção da área amostral e quantificação dos valores de pixel pelo software (B). Imagens geradas por Esaote MyLabVet30 Gold, com probe de 7,5 MHz (A, B). Histograma da imagem original, baseado na disposição dos valores de pixel em matriz. Imagem retirada de software de análise de imagens (Quantiporo) (C).

A técnica de análise computacional tem aplicação em vários campos do diagnóstico por imagem, incluindo avaliações reprodutivas, tanto de machos (ecotextura e função testicular) (ARTEAGA et al., 2005; GÁBOR et al., 1998) quanto de fêmeas, principalmente em estudos relativos à função ovariana (SINGH et al., 1997; TOM et al., 1998). Estudos envolvendo análise computacional de imagens demonstraram relação entre o estado fisiológico de estruturas ovarianas e sua ecotextura nas diferentes fases do ciclo estral (HERZOG et al., 2008; SINGH et al., 1998). Na avaliação da função luteal, a análise de ecotextura do corpo lúteo (CL) permite uma estimativa de sua funcionalidade, mesmo sem o conhecimento prévio da fase do ciclo estral (SIQUEIRA et al., 2009; TOM et al., 1998). A análise de imagens permite ainda a diferenciação entre folículos funcionais e atrésicos (TOM et al., 1998; VASSENA et al., 2003), auxiliando nos procedimentos de reprodução assistida, principalmente em humanos (BIAN et al., 2006; BIRTCH et al., 2005).

Apesar de promissora, a análise computacional de imagens ainda apresenta algumas limitações. A principal está relacionada à padronização dos procedimentos para a geração das imagens e a seleção dos campos para análise. Diferenças relacionadas ao arranjo dos cristais e à frequência das probes influenciam a qualidade das imagens geradas e, consequentemente, o resultado da avaliação posterior dos pixels. Da mesma forma, variações no posicionamento da probe e dos órgãos internos e a ocorrência de artefatos de imagens, comuns na ultrassonografia, podem interferir diretamente na análise. Dessa forma, a despeito das evidências científicas de que a técnica possa ser utilizada na determinação do estado fisiológico de estruturas ovarianas, ainda não existe consenso sobre a metodologia a ser adotada ou valores de referência para comparação.

Ultrassonografia 3D/4D

A ultrassonografia tridimensional (3D) é um avanço natural na área de diagnóstico por imagem. Na imagem tridimensional, é possível realizar mensurações volumétricas, além de rotacionar a imagem em todas as direções, permitindo, assim, que órgãos e tecidos sejam avaliados por uma perspectiva espacial. Na medicina humana, a tecnologia 3D já vem sendo utilizada para estudar o desenvolvimento e as malformações fetais (WERNER JÚNIOR et al., 2016). Na medicina veterinária, estudos vêm sendo desenvolvidos para a aplicação dessa tecnologia na avaliação de gestação em animais silvestres (ROELLIG et al., 2011) e de produção (KOTOYORI et al., 2012; LE CLEACH et al., 2012).

Nos equipamentos 3D, o modelo tridimensional é gerado por um software interno, com base em imagens bidimensionais, geradas de forma convencional, pela varredura manual da estrutura em estudo (Figura 4A). Consequentemente, diferenças na velocidade da movimentação da probe podem causar distorções no modelo final. Os equipamentos 4D são equipados com probes que fazem a varredura de forma automática, evitando essas distorções. Em ambos os casos, contudo, a contenção do animal e a imobilidade da estrutura avaliada são condições de garantia da qualidade do modelo final. Alternativamente, a modelagem computacional pode ser utilizada na construção de modelos tridimensionais com base em sequências de imagens bidimensionais (geradas em modo B, em equipamentos convencionais). Essa abordagem foi utilizada no estudo da vascularização ovariana (ARASHIRO et al., 2013; VIANA et al., 2013).

Figura 4. Imagem tridimensional gerada por ultrassonografia 3D de um feto bovino com cerca de 40 dias. É possível observar a região da cabeça e os membros anteriores e posteriores; a parte caudal do modelo tridimensional foi distorcida por causa da movimentação do animal durante o exame (A). Modelo físico gerado por manufatura aditiva (impressão em 3D) com base em imagem ultrassonográfica tridimensional, usando aparelho MyLab Vet 30 Gold, Esaote, com probe de 7,5 MHz (B).

Apesar das dificuldades técnicas e do alto custo dos equipamentos, a ultrassonografia 3D/4D apresenta um amplo campo de possibilidades de aplicação no estudo e na avaliação do trato genital e gestação. Modelos tridimensionais possibilitam uma visualização direta de alterações estruturais, como no caso da sexagem fetal ou da caracterização de malformações fetais, algumas das quais não são claramente identificáveis em imagens bidimensionais. Da mesma forma, avaliações volumétricas são de grande importância para a avaliação funcional de determinados órgãos e estruturas, particularmente nos casos em que a massa de tecido tem implicação direta na fisiologia. Modelos tridimensionais também permitem a geração de modelos físicos por manufatura aditiva (também conhecida como impressão 3D), para fins didáticos e de pesquisa (Figura 4B).

A modelagem tridimensional vem sendo utilizada rotineiramente na medicina humana, associada a tecnologias de imagem de alta energia, que geram imagens de alta definição, como a tomografia computadorizada e a ressonância magnética. Seu uso associado à ultrassonografia foi inicialmente limitado por questões técnicas, particularmente relacionadas à qualidade de imagem. Entretanto, a melhoria da qualidade tecnológica dos equipamentos de ultrassonografia, associada à incorporação de outras tecnologias, como a análise computacional e o Doppler, abrem a perspectiva para um crescente uso da ultrassonografia 3D/4D.

Referências

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Capítulo 6
Utilização da ultrassonografia na avaliação de carcaças

Marina de Nadai Bonin

Gelson Luis Dias Feijó

Rodrigo da Costa Gomes

Introdução

A carcaça bovina é um dos fatores de maior importância em sistemas de produção de gado de corte, porque é um dos principais determinantes da remuneração do produtor. A composição da carcaça está sujeita a interferências variadas, como nutrição, idade, sexo e genética dos animais. São esses fatores que, combinados, vão estabelecer a qualidade da carcaça, que, por sua vez, vai provocar impactos diretos sobre os valores recebidos pelo produtor, seja pelo rendimento, seja pela qualidade da carne.

Diversas estratégias têm sido traçadas para aumentar a eficiência produtiva da cadeia de gado de corte, buscando aliar o melhor tipo animal a sistemas de criação que possam trazer bons retornos econômicos. A escolha de raças e/ou indivíduos que aliem os melhores desempenhos produtivos com a melhor composição de carcaça também pode agregar eficiência ao sistema, evitando gastos desnecessários, principalmente na fase de terminação, que é a menos eficiente e a mais onerosa de todo o processo produtivo. Outra estratégia importante é adequar a nutrição do animal para um melhor desempenho em cada fase de criação, procedimento que pode, aliás, abreviar algumas fases, como a da idade de novilhos para o abate.

Atualmente, no Brasil, o ponto ideal de abate é determinado, em primeiro lugar, pelo grau de acabamento, e, em segundo, pelo peso da carcaça. O acabamento mínimo desejado pelos frigoríficos é de 3 mm de espessura de gordura subcutânea (EGS) com pesos de carcaça mínimos de 13 arrobas a 14 arrobas para fêmeas e de 16 arrobas a 17 arrobas para machos. Valores inferiores ou muito superiores a esses podem ser motivo de desvalorização das carcaças, talvez por impactarem o rendimento industrial e a qualidade da carne das carcaças.

A espessura de gordura subcutânea tem alta correlação com a quantidade de gordura intermuscular, também chamada de “gordura de apara”. Por isso, animais muito gordos (com EGS acima de 10 mm) resultarão em menor rendimento de cortes e menor rendimento de porção comestível da carcaça, por possuírem grande quantidade desse tipo de gordura. Já carcaças muito pesadas (acima de 22 arrobas) não são desejáveis por apresentarem cortes com maior tamanho e mais peso, o que resulta em problemas de padronização de produtos dentro da indústria.

Independentemente do sistema produtivo adotado, é essencial que pré-requisitos sejam obedecidos, procurando, por exemplo, fazer uso de ferramentas que indiquem, com precisão, a composição corporal dos animais vivos. Assim, será possível selecionar animais superiores dentro do rebanho, os quais atenderão aos padrões mínimos de carcaça exigidos pela indústria.

A ultrassonografia em tempo real é uma tecnologia extensivamente utilizada para a avaliação de carcaças in vivo, que torna possível predizer o mérito da carcaça sem precisar abater o animal. Essa técnica tem sido empregada com sucesso, em substituição a avaliações visuais e a testes de progênie, principalmente porque consegue adicionar acurácia e economia ao processo de determinação do grau de acabamento e do valor genético dos animais, no que diz respeito às características de carcaça.

Várias espécies animais de produção podem ser avaliadas por esse método, entre elas bovinos, ovinos, suínos e até mesmo aves, ressalvando-se, porém, as particularidades de cada espécie quanto aos pontos anatômicos de coleta de imagem e o tipo de equipamento utilizado.

Como existe alta correlação entre as medidas de ultrassonografia e as realizadas na carcaça ao vivo, após o abate, as medidas obtidas com aquela técnica podem ser utilizadas para a predição acurada da quantidade de músculos, do rendimento de cortes nobres e do grau de deposição de gordura na carcaça. De posse dessas informações, o produtor poderá tomar decisões acertadas sobre a fazenda, entre elas, identificar diferenças entre os animais com vista à melhoria genética do rebanho.

Princípios da técnica

O ultrassom emite ondas sonoras que possuem frequência para além da faixa audível para o ouvido humano: os seres humanos podem ouvir frequências entre 20 hertz e 20.000 hertz, enquanto o ultrassom emite ondas sonoras acima de 20.000 hertz. Para a avaliação de carcaças, geralmente são utilizadas frequências de 3,5 MHz (TAIT, 2012).

As ondas de ultrassom são geradas por um transdutor composto por cristais piezoelétricos, que converte energia elétrica em ultrassom. Esses pulsos são refletidos pelos diferentes tipos de tecidos do corpo do animal. Algumas das ondas sonoras penetram no tecido, enquanto outras são refletidas de volta para o transdutor, sendo chamadas de “ecos”. Os ecos que retornam à fonte de som (transdutor) são detectados e exibidos na tela do aparelho em formato anatômico transversal (NYBORG; ZISKEN, 1985), com imagens compostas por várias tonalidades.

A densidade dos tecidos altera a velocidade com que as ondas de ultrassom são conduzidas. Tecidos mais densos, como o tecido ósseo, por exemplo, conduzem ondas sonoras com maior velocidade do que tecidos moles, como o tecido adiposo (AMIN, 1995). Quanto maior a velocidade de reflexão das ondas, mais clara a imagem visualizada na tela do ultrassom. Dessa maneira, o tecido ósseo será visualizado em tons de cinza-claro, enquanto o tecido adiposo, em tons de cinza-escuro, tendendo a preto.

Equipamentos

Os equipamentos de ultrassom utilizados para a avaliação de carcaças bovinas são chamados de “modo B”, com imagens em tempo real, e requerem um console e transdutores lineares de 17 cm a 18 cm, com frequência de 3,5 MHz (Figura 1). Esse mesmo transdutor pode ser utilizado para a coleta de imagens de profundidade e largura do peito de aves; no entanto, para ovinos e suínos, recomenda-se a utilização de transdutores lineares menores, de 12 cm de comprimento.

Figura 1. Transdutor de 18 cm de comprimento e 3,5 mHz, para a avaliação de carcaças de bovinos.

Foto: Marina de Nadai Bonin

As imagens obtidas pelo ultrassom são capturadas por uma placa de vídeo e armazenadas em computador, para posterior análise em programas específicos. Alguns equipamentos possuem sistemas internos de armazenamento, como cartões de memória. Nesse caso, as imagens podem ser salvas no próprio equipamento para que, posteriormente, sejam interpretadas por programas externos ou do próprio equipamento.

Antes de dar início a cada avaliação da carcaça bovina, deve-se conferir atentamente as configurações internas e externas do equipamento, ajustando-as de acordo com as recomendações específicas a cada tipo de aparelho e ao programa utilizado. Essas informações podem ser transmitidas pelo fabricante do programa ou, então, podem ser obtidas na internet, na página do conselho de ultrassom americano, o Ultrasound Guidelines Council (2012).

Além do ultrassom propriamente dito, alguns acessórios são necessários para a coleta de imagens de qualidade, entre eles o acoplante acústico (guia acústica), o congelador de imagens, a placa de captura e o notebook com o programa para a coleta e o armazenamento das imagens. Alguns aparelhos, como o Aquilla Pie Medical, possuem um programa embutido no console, que permite o armazenamento e o processamento das imagens no próprio equipamento.

O acoplante acústico serve para remover o ar existente entre o transdutor e o corpo do animal, promovendo um melhor contato entre essas duas superfícies e favorecendo a qualidade das imagens. A superfície do transdutor é rígida e plana e não se encaixa adequadamente ao formato convexo do lombo; por isso, para imagens tomadas perpendicularmente ao músculo Longissimus, é preciso recorrer a essas guias (Figura 2). Nas avaliações de carcaça por ultrassom, utiliza-se o óleo vegetal refinado, que, além de adaptar-se melhor às secreções da pele e ao pelo do animal, é de baixo custo e pode ser utilizado em larga escala. Em bovinos, recomenda-se, em geral, que seja utilizado 1 L de óleo para cada dez animais, podendo essa fórmula variar conforme o tipo de animal ou de medida coletada, conforme o comprimento do pelo e/ou se forem detectadas sujidades, o que dificulta a coleta das imagens e pode aumentar o consumo.

Figura 2. Transdutor com guia acústica utilizada para a coleta de imagens de área de olho de lombo e espessura de gordura subcutânea na costela.

Foto: Marina de Nadai Bonin

As guias acústicas devem ser trocadas periodicamente, pois com o passar do tempo tornam-se gastas e riscadas, o que prejudica a condução das ondas de ultrassom e, consequentemente, a qualidade das imagens. A recomendação dos fabricantes é que sejam trocadas a cada 2 mil animais; no entanto, sua durabilidade depende dos cuidados de uso e conservação, podendo ser prolongado com cuidados simples, como limpeza com sabão neutro, secagem com papel macio do tipo lenço de papel e envolvimento em filme plástico, depois de usada e limpa.

O congelador de imagens consiste em um dispositivo ligado ao ultrassom, que pode ser acionado pelas mãos ou pés do técnico, durante a coleta de imagens. Funciona como um “controle remoto”, cuja principal finalidade é facilitar o trabalho de congelamento das imagens, já que esse procedimento é repetido várias vezes durante as avaliações. Nem todos os modelos de transdutores requerem esse acessório. Em alguns, como no apresentado na Figura 1, o mecanismo já está acoplado ao aparelho.

Estão disponíveis no mercado vários programas para a captura e a interpretação de imagens. Com eles é possível identificar e salvar cada imagem individualmente e ainda incluir informações relativas ao animal, como peso, raça, sexo, data de nascimento, lote de manejo (Figura 3). Ao final de cada coleta, as imagens salvas devem ser enviadas aos laboratórios credenciados, para interpretação e emissão dos relatórios, com os resultados das avaliações.

Figura 3. Exemplo de programa utilizado para coleta e interpretação de imagens.

Locais de coleta das imagens

Em bovinos, as medidas tradicionalmente avaliadas por ultrassonografia são a área de olho de lombo (AOL), a espessura de gordura subcutânea no lombo (EGS), a espessura de gordura subcutânea na picanha (EGP) e a porcentagem de gordura intramuscular (GI). As mesmas medidas são realizadas em ovinos e suínos, com exceção da EGP. Já em aves, as medidas de profundidade e largura de peito são tomadas como indicativo de rendimento de cortes de alto valor comercial da carcaça.

Nos bovinos, as imagens coletadas fundamentam-se em dois sítios anatômicos básicos: o músculo Longissimus e a garupa (Biceps femoris). No Longissimus, também conhecido como “contrafilé” ou “lombo”, as avaliações são realizadas entre a 12ª e a 13ª costela. Na garupa, perpendicularmente ao íleo, é avaliada a espessura de gordura subcutânea na picanha (EGP).

A AOL é um indicativo de musculosidade do animal. Possui alta correlação com o rendimento de cortes nobres da carcaça, principalmente de traseiro. A EGS está relacionada ao grau de acabamento, e sua importância advém fato de proteger as carcaças contra o frio nas câmaras frigoríficas. Atualmente, no Brasil, considera-se, como mínimo desejado, animal com acabamento mediano, ou seja, com 3 mm a 6 mm de EGS.

Para a avaliação da AOL e da EGS, as imagens são tomadas posicionando-se o transdutor perpendicularmente ao músculo Longissimus, entre a 12ª e a 13ª costela (Figura 4), obtendo-se, assim, uma imagem transversal do músculo. Para uma correta avaliação da AOL, é de extrema importância que alguns pontos de referência sejam bem definidos na imagem, entre eles as bordas na parte medial e lateral do músculo Longissimus e também os músculos Spinalis dorsi e intercostais, como indicados nas Figuras 5 e 6. Nessa imagem, serão traçadas a área do músculo Longissimus (AOL), em centímetros quadrados, e a EGS, avaliada no terço final do músculo e expressa em milímetros.

Figura 4. Locais para coleta de imagens da área de olho de lombo e espessura de gordura subcutânea (1), porcentagem de gordura intramuscular (2) e espessura de gordura na picanha (3).

Fonte: Adaptado de Ultrasound Guidelines Council (2012).

Figura 5. Figura esquemática dos pontos de referência para coleta de imagens de ultrassom entre a 12ª e a 13ª costela: Longissimus (1); Spinalis dorsi (2); Multifidus dorsi (3); intercostais (4); Longissimus costarum (5); Acorn (6); e gordura subcutânea (7).

Ilustração: Gelson Luis Dias Feijó.

Figura 6. Imagem de ultrassom coletada sobre o músculo Longissimus, entre a 12ª e a 13ª costela, para avaliação da área de olho de lombo (AOL), demarcada em verde, e da espessura de gordura subcutânea (EGS), indicada na figura.

A GI, também chamada de “gordura de marmoreio”, está intimamente associada à qualidade da carne, principalmente a fatores como maciez, suculência e sabor. Carnes com maior quantidade de gordura intramuscular tendem a ser mais macias, suculentas e saborosas, e são bastante apreciadas para preparos na forma de churrasco e grelhados.

Na ultrassonografia, as avaliações da GI são realizadas ao se posicionar o transdutor paralelamente ao músculo Longissimus (Figura 4), tendo como pontos de referência as três últimas costelas (11ª, 12ª e 13ª), que devem estar bem definidas, já que as avaliações de GI pelo programa serão realizadas entre as duas últimas, como demonstrado na Figura 7. Durante a obtenção dessa imagem, o músculo Spinalis dorsi deve ser evitado, não podendo aparecer em mais do que um terço da imagem, pois, quando isso acontece, a profundidade do músculo diminui, impossibilitando o adequado posicionamento do quadrado no local da avaliação, o que acaba por prejudicar a qualidade e a confiabilidade das medidas.

Figura 7. Imagem coletada sobre o músculo Longissimus, entre a 11ª e a 13ª costela, para avaliação da porcentagem de gordura intramuscular (GI). O quadrado na figura representa o local onde é feita a avaliação da GI.

As estimativas de GI pelo ultrassom estão baseadas nas diferentes densidades dos tecidos. Segundo Wall (2007), essas diferenças são retratadas nas imagens na forma de mudança de cor, em tons de cinza. Como o tecido muscular tem densidade diferente da densidade da gordura, é possível estimar a quantidade de gordura e de músculo numa base percentual, resultando nos valores de porcentagem de gordura intramuscular. Por isso, é de extrema importância que, no ato da coleta de imagens de GI, não haja nenhum tipo de interferência na imagem, e que essa esteja bem nítida, sem borrões ou com falta de contato entre o transdutor e o corpo do animal, o que causaria erro nas estimativas de GI.

No Brasil, a picanha é um dos cortes de maior valor agregado. No entanto, na ultrassonografia, a medida da espessura de gordura na picanha não está diretamente ligada a esse propósito. Durante o crescimento do animal, a deposição de gordura não ocorre de maneira uniforme em todo o corpo, sendo iniciada pelos dianteiro e traseiro, e, por último, depositando-se no lombo. Dessa maneira, a EGP tende a ser depositada anteriormente ao lombo e tem sido utilizada como medida de precocidade de acabamento (BONIN et al., 2015). Em fêmeas, a deposição de gordura na picanha está associada a maior precocidade reprodutiva (COSTA FILHO et al., 2009). A EGP é avaliada posicionando-se o transdutor perpendicularmente ao terço final do íleo, para desse obter uma imagem sobre a junção dos músculos Gluteus medius e Biceps femoris (Figura 8). A EGP é medida justamente na junção entre esses dois músculos e deve ser expressa em milímetros.

Figura 8. Imagem coletada sobre os músculos Gluteus medius e Biceps femoris para a avaliação da espessura de gordura subcutânea sobre a picanha (EGP).

Fatores que podem alterar a qualidade das imagens

A qualidade das imagens é condição essencial para que as medidas sejam precisas e representem, com a maior exatidão possível, as medidas reais da carcaça após o abate. Para isso, alguns pontos devem ser observados, como:

Observar a correta contenção dos animais, de preferência em troncos de parede móvel com abertura lateral, os quais, além de promoverem a correta contenção, darão um bom acesso aos pontos anatômicos para a coleta das imagens.

Manter um bom posicionamento do animal no momento da avaliação, o qual deverá necessariamente permanecer em pé. Em hipótese alguma as imagens deverão ser coletadas estando o animal deitado, sentado ou com a cabeça abaixada, o que pode causar distorções nos tecidos moles da carcaça, prejudicando principalmente as medidas de AOL.

Limpar os animais com o auxílio de uma raspadeira ou escova. A presença de sujidades no animal, como poeira, lama e outros artefatos, as quais possam prejudicar a condução das ondas de ultrassom, pode resultar em imagens de má qualidade. Por isso, animais molhados deverão ser secos antes das avaliações, visto que a pele úmida impede a condução das ondas de ultrassom até os tecidos e, consequentemente, interfere na nitidez das imagens.

Antes da coleta das imagens, aparar os pelos com mais de 2,5 cm de comprimento, utilizando, para isso, tosquiadoras elétricas.

Animais muito gordos ou muito magros podem dificultar a coleta de imagens. No primeiro caso, as imagens tendem a ficar muito claras, dificultando a visualização e a definição dos pontos de referência. Por isso, é preciso eliminar qualquer problema que diminua ainda mais a qualidade das imagens, como falta de óleo ou presença de sujeiras. Em animais magros, a proeminência dos processos espinhosos das vertebras torácicas dificulta o contato entre a guia acústica e o lombo do animal, sendo, por isso, necessária a tomada de imagens sem o uso da guia acústica.

Investigar a presença de interferências, de vários tipos, no ultrassom, causadas por equipamentos eletrônicos próximos ao aparelho, tais como balanças, celulares, estabilizadores, ou até mesmo interferências causadas pela rede elétrica. A presença de interferências em imagens de gordura intramuscular é motivo de rejeição, não podendo ser interpretadas, pois, provavelmente, a interferência ajudará a superestimar essa medida.

Cuidar da correta configuração do software e do ultrassom.

Definir os pontos de referência das imagens, a fim de facilitar a interpretação delas. Imagens com pontos de referência mal definidos ou com problemas graves, como falta de contato, imagens escuras ou borradas e indefinição de bordos laterais e mediais podem causar a rejeição das imagens.

Contar com técnicos experientes. A experiência dos técnicos é fundamental para a coleta de imagens de boa qualidade, cabendo a eles, portanto, tomar os cuidados citados nos itens anteriores. Técnicos experientes são capazes de detectar problemas que possam prejudicar a qualidade das imagens e corrigi-los ou evitá-los, a fim de assegurar a qualidade das informações geradas.

Correlações com medidas de carcaça

As correlações das medidas de ultrassom com a carcaça estão diretamente ligadas à acurácia das medidas obtidas diretamente na carcaça ao abate e vice-versa (como relatado no item anterior). No abate, vários fatores podem contribuir para diminuir a correlação entre as duas medidas. O primeiro deles concerne à suspensão das carcaças pelo tendão de Aquiles, causando uma tensão maior na musculatura do lombo, se comparada àquela estando o animal em pé, podendo, então, alterar a AOL. O segundo deles diz respeito à esfola. É que, na esfola, é comum que, junto com o couro, seja retirada parte da gordura subcutânea, principalmente na região do lombo, local onde as medidas de ultrassom são tomadas, reduzindo, assim, a correlação entre essas medidas. O terceiro ponto se refere à mudança do estado metabólico dos tecidos após o abate e o resfriamento da carcaça, o que também pode causar menor associação entre as medidas de ultrassom e as da carcaça. Levando em consideração esses pontos, sempre se deve primar para que a correlação das medidas de ultrassom com as de carcaça sejam as maiores possíveis. Em geral, as variações obtidas por técnicos experientes são pequenas e representam com fidelidade as reais medidas da carcaça (Figura 9), com desvios menores que 6,5 cm2 para AOL, 1,8 mm para EGS e 1% para GI (GREINER, 2012).

Figura 9. Variações nas medidas de área de olho de lombo da carcaça avaliadas por ultrassom e após o abate.

Fonte: Adaptado de Gresham (1995).

Além disso, as altas correlações genéticas e fenotípicas (Tabela 1; Figura 10), aliadas à moderada herdabilidade (ao redor de 0,30), indicam a viabilidade do uso da ultrassonografia para a seleção de caraterísticas de carcaça (BONIN et al., 2015; PINHEIRO et al., 2011; YOKOO et al., 2008; ZUIN et al., 2012).

Tabela 1. Correlações genéticas e fenotípicas entre as mesmas medidas – área de olho de lombo e espessura de gordura subcutânea –, avaliadas ao abate e por ultrassonografia.

Área de olho de lombo

Espessura de gordura subcutânea

Fonte

0,91(1)

0,86(1)

Rouse et al. (1992)

0,74(1)

0,87(1)

Silva et al. (2003)

0,63(2)

0,53(2)

Spangler e Moser (2012)

0,65(2)

0,91(2)

Bonin (2012)

⁽¹⁾ Correlação fenotípica. (2) Correlação genética.

Figura 10. Correlação entre medidas de gordura intramuscular avaliadas na carcaça ao abate e por ultrassom.

Fonte: Adaptado de Ultrasound Guidelines Council (2012).

A utilização de medidas de carcaça avaliadas por ultrassom em programas de melhoramento genético já é uma realidade no Brasil, porém ainda há muito a fazer para que tragam mais benefícios ao produtor e à indústria. Para o produtor, a melhoria de características de carcaça no rebanho induzirá a padronização dos animais no que concerne à musculatura e ao acabamento, o que poderá, por consequência, facilitar ações de manejo, alimentação e abate dentro da propriedade. Essas estratégias resultarão em maior taxa de desfrute e, consequentemente, na redução de custos – desnecessários – com a alimentação de animais menos eficientes para a produção de carne ou acabamento.

Para as indústrias frigoríficas, a melhoria genética dos animais para carcaça parece ser o horizonte almejado para a solução de problemas recorrentes, tais como padronização de lotes, peso ao abate, acabamento de carcaça e qualidade da carne. Esse procedimento já é corriqueiro em alguns grandes frigoríficos brasileiros, que lançam mão de programas de bonificação para carcaças de qualidade, a fim de aumentar a padronização da matéria-prima e, assim, obterem maior poder de negociação e planejamento da sua produção. Com isso, agrega-se valor aos produtos e, consequentemente, à carne bovina brasileira.

A ultrassonografia de carcaças participa desse cenário como ferramenta essencial para produtores e indústria interessados na padronização da produção e na busca de animais e carnes com qualidade. Conforme já foi dito, avaliações de carcaça por ultrassonografia possuem alta correlação com medidas diretas de carcaça e podem ser empregadas como ferramentas acuradas para a predição in vivo da composição corporal dos animais e para a seleção dos rebanhos de gado de corte com base no mérito de carcaça.

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