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Campo DCValorLengua/Idioma
dc.contributor.authorSOUZA, L. G. S.
dc.contributor.authorSOUZA NETO, E. R. DE
dc.contributor.authorBISPO, A. S. DA R.
dc.contributor.authorSILVA, P. H. DA
dc.contributor.authorANDRADE, E. C. de
dc.date.accessioned2026-02-13T07:06:31Z-
dc.date.available2026-02-13T07:06:31Z-
dc.date.created2026-02-12
dc.date.issued2025
dc.identifier.citationIn: JORNADA CIENTÍFICA EMBRAPA MANDIOCA E FRUTICULTURA, 18., 2024. Inovação para a sustentabilidade agrícola. Cruz das Almas: Embrapa Mandioca e Fruticultura, 2025. p. 108. (Embrapa Mandioca e Fruticultura. Eventos Técnicos & Científicos, 003).
dc.identifier.urihttp://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/1184404-
dc.descriptionA produção de dsRNA em Escherichia coli (HT-115) foi realizada em meios de cultura LB (Lauril Broth) e TB (Terrific Broth), com e sem suplementação de sais minerais, contendo ampicilina a 100 mg.mL-1. O processo fermentativo de produção foi conduzido a 37 °C e 250 rpm e o crescimento bacteriano foi verificado em espectrofotômetro até atingir DO600nm de 0,4. Após esse período, a suspensão bacteriana foi induzida com IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) a uma concentração final de 0,4 mM ou Lactose 1 mM e mantida em agitação até atingir DO600nm de 1,0, momento em que a bactéria foi coletada por centrifugação a 9000 rpm por 5 minutos. Em seguida, os pellets bacterianos foram ressuspendidos em 800 µL de SDS 0,1% em tampão PBS 1X e fervidos por dois minutos e o dsRNA extraído utilizando protocolo com Trizol, de acordo com as recomendações do fabricante. Após a extração, as amostras foram submetidas ao tratamento com DNase e S1nuclease, a partir do protocolo do kit TURBO™ DNAse (Thermo), a fim de garantir que as amostras continham apenas RNA de fita dupla, que é o alvo da quantificação. Posteriormente, as amostras não tratadas e tratadas foram quantificadas em espectrofotômetro Nanodrop e os dsRNAs extraídos foram analisados por eletroforese em gel de agarose 1,5% para avaliar sua integridade. Após obtenção destes resultados, foi elaborado um planejamento fatorial utilizando um Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) com duas variáveis (concentração dos indutores e suplementação com MgCl2 + solução de elementos traços (SET)) gerando 12 ensaios para otimização do processo de produção. Todo experimento foi conduzido em duplicata e para análise estatística foi utilizado programa “Statistic 7.0®”. [...].
dc.language.isopor
dc.rightsopenAccess
dc.titleRefinamento de parâmetros para produção de dsRNA em Escherichia coli (HT-115).
dc.typeResumo em anais e proceedings
dc.subject.thesagroPraga
dc.subject.thesagroGenética Molecular
dc.subject.thesagroEscherichia Coli
dc.subject.nalthesaurusMolecular genetics
dc.subject.nalthesaurusPlant pests
riaa.ainfo.id1184404
riaa.ainfo.lastupdate2026-02-12
dc.contributor.institutionLUIS GUSTAVO SALES SOUZA, CENTRO UNIVERSITÁRIO MARIA MILZA; EDVANDO RIBEIRO DE SOUZA NETO, CENTRO UNIVERSITÁRIO MARIA MILZA; ALINE SIMÕES DA ROCHA BISPO; PAULO HENRIQUE DA SILVA; EDUARDO CHUMBINHO DE ANDRADE, CNPMF.
Aparece en las colecciones:Resumo em anais de congresso (CNPMF)

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