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dc.contributor.authorFAJARDO, T. V. M.eng
dc.contributor.authorBARROS, D. R.eng
dc.contributor.authorNICKEL, O.eng
dc.contributor.authorKUHN, G.eng
dc.contributor.authorZERBINI, M.eng
dc.date.accessioned2019-08-09T00:47:50Z-
dc.date.available2019-08-09T00:47:50Z-
dc.date.created2008-04-11
dc.date.issued2007
dc.identifier.citationFitopatologia Brasileira, Brasília, v. 32, n. 6, p. 496-500, 2007.eng
dc.identifier.urihttp://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/542752-
dc.descriptionGrapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), the main viral species ofthe grapevine leafroll complex, causes yield and quality reduction in grapes (Vitis spp.). The coat protein gene was RT-PCR-amplified from total RNA extracted from infected grapevine leaves and the amplified fragment was cloned and completely sequenced. The fragment was subsequently subcloned into the pRSET-C expression vector. The recombinant plasmid was used to transform Escherichia coli BL21 :DE3 and express the capsid protein. The coat protein, fused to a 6 His-tag, was purified by affinity chromatography using an Ni-NTA resin. The identity ofthe purified protein was confirmed by SDS-PAGE and Westem blot. The in vitro-expressed protein was quantified and used for rabbit immunizations. The antiserum was shown to be sensitive and specific for the detection ofGLRaV-3 in grapevine extracts in Westem blot and DAS-ELISA assays, with no unspecific or heterologous reactions against other non-serologically related viruses being observed. Additional keywords: grapevine, GLRaV-3, recombinant protein, serology, antibodies. Expressão da proteína capsidial do Grapevine leafroll-associated virus 3 em Escherichia coli e produção de anticorpos policlonais Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), a principal espécie viral do complexo do enrolamento da folha da videira tViüs spp.), causa reduções no rendimento e na qualidade da uva. O gene da proteína capsidial foi amplificado via RTPCR a partir de RNA total, extraído de folhas de videira infectadas. O fragmento amplificado foi clonado e completamente seqüenciado. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-C. O plasmídeo recombinante foi utilizado para a expressão da proteina capsidial em Escherichia co/i BL21:DE3. A proteína capsidial, ligada a uma cauda de 6-His, foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDSPAGE e Wesfern blot e, após quantificação, foi utilizada para imunizar coelhos. O anti-soro mostrou-se sensível e específico para a detecção do GLRaV-3 em extratos de videira por Wesfern blot e DAS-ELISA, não tendo sido observadas reações inespecíficas ou heterólogas contra outros vírus sorologicamente não relacionados. Palavras-chave adicionais: videira, GLRaV-3, proteína recombinante, sorologia, anticorpos.eng
dc.language.isoengeng
dc.rightsopenAccesseng
dc.subjectEnrolamento da folha da videiraeng
dc.subjectProteína recombinanteeng
dc.subjectSorologiaeng
dc.titleExpression of grapevine leafroll-associated virus 3 coat protein gene in Escherichia coli and production of polyclonal antibodies.eng
dc.typeArtigo de periódicoeng
dc.date.updated2019-08-09T00:47:50Z
dc.subject.thesagroAnticorpoeng
dc.subject.thesagroDoença de Plantaeng
dc.subject.thesagroUvaeng
dc.subject.thesagroVíruseng
dc.subject.thesagroViticulturaeng
dc.subject.nalthesaurusGrapevine leafroll-associated virus 3eng
riaa.ainfo.id542752eng
riaa.ainfo.lastupdate2019-08-08
dc.contributor.institutionTHOR VINICIUS MARTINS FAJARDO, CNPUV; Danielle R. Barros, UFV; OSMAR NICKEL, CNPUV; GILBERTO KUHN, CPACT; Murilo Zerbini, UFV.eng
Aparece nas coleções:Artigo em periódico indexado (CNPUV)

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