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Campo DCValorIdioma
dc.contributor.authorPAULA, R. A. dept_BR
dc.contributor.authorFREITAS, R. F. F. ept_BR
dc.contributor.authorGUIMARAES, M. F. M.pt_BR
dc.contributor.authorMARCELINO, F. C.pt_BR
dc.contributor.authorARCURI, E. F.pt_BR
dc.date.accessioned2011-04-10T11:11:11Zpt_BR
dc.date.available2011-04-10T11:11:11Zpt_BR
dc.date.created2009-12-11pt_BR
dc.date.issued2009pt_BR
dc.identifier.citationIn: CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA, 25., 2009, Porto de Galinhas. Anais... [São Paulo]: Sociedade Brasileira de Microbiologia, 2009. Seção Resumos, ref. 1420-2. 1 CD-ROM.pt_BR
dc.identifier.urihttp://www.alice.cnptia.embrapa.br/alice/handle/doc/577770pt_BR
dc.descriptionA análise de PCR em Tempo Real está sendo cada vez mais utilizada para detecção e quantificação de patógenos em amostras de alimentos, uma vez que gera resultados mais rápidos e específicos. A restrição para um uso mais amplo desta técnia é que devido a sua alta sensibilidade, os teste identificam o DNA de células mortas, tornando-o inadequado para fins de diagnóstico. Para contornar este problema tem sido proposto o uso do corante Brometo de Etídeo Monoazida (EMA) para discriminar células viáveis de células mortas. Em estudos preliminares foi verificado que EMA inibe amplificação de células inviáveis de Listeria monocytogenes, por PCR convencional. O objetivo deste estudo foi padronizar a técnica EMA-PCR em Tempo Real para detecção de células viáveis de L. monocytogenes. Foram construídos primers e sonda TaqMan específicos para L. monocytogenes e o gene prfA foi utilizado como seqüência alvo. Foram avaliadas várias espécies de Listeria, sendo que houve amplificação apenas de L. monocytogenes indicando especificidade da amplificação e L. monocytogenes ATCC 7644 foi selecionada para os testes de EMA-PCR. Concentrações variadas de EMA foram adicionadas a microtubos com 108 células viáveis ou inviáveis de L. monocytogenes (tratamento térmico de 98 oC/20 minutos) e estes foram expostos à luz (650 W) por 15 minutos para ativação e fotólise do EMA. Em segida, foi realizada a extração de DNA e PCR em Tempo Real. O DNA foi extraído após tratamentos subseqëntes das células com proteases e fervura. A reação de amplificação foi preparada com TaqMan Universal Master Mix 1X (Applied Biosystem), 250 ng de DNA, 400 nM de cada primer e 400 nM de sonda. A concentração de 6 ug/mL de EMA foi necessária para inibir a amplificação de DNA de células inviáveis de L. monocytogenes sendo que nesta concentração não houve interferência na amplificação de DNA de células viáveis. Após a definição desta concentração, o tratamento das células com 6 ug/mL de EMA foi realizado novamente, porém os microtubos foram expostos à luz por diferentes períodos de tempo para otimização do tempo de exposição à luz. O tempo de 5 minutos foi necessário para a completa fotólise de EMA. A técnica EMA-PCR em Tempo Real apresenta-se como uma ferramenta eficiente na detecção de apenas células viáveis de L. monocytogenes presentes numa amostra.pt_BR
dc.language.isoporpt_BR
dc.rightsopenAccesspt_BR
dc.titleUso de brometo de etídeo monoazida e PCR em tempo real para detecção de células viáveis de listeria monocytogenes.pt_BR
dc.typeResumo em anais e proceedingspt_BR
dc.date.updated2012-10-16T11:11:11Zpt_BR
dc.subject.thesagroDNApt_BR
dc.subject.thesagroHigiene de alimentopt_BR
dc.subject.thesagroNutrição humanapt_BR
dc.subject.thesagroBactériapt_BR
dc.subject.nalthesaurusBacterial infectionspt_BR
dc.subject.nalthesaurusFood and Human Nutritionpt_BR
riaa.ainfo.id577770pt_BR
riaa.ainfo.lastupdate2012-10-16pt_BR
dc.contributor.institutionROSINÉIA APARECIDA DE PAULA, AGROGENÉTICA; RENATA FLÁVIA FERREIRA E FREITAS, AGROGENÉTICA; MARTA FONSECA MARTINS GUIMARAES, CNPGL; FRANCISMAR CORREA MARCELINO, CNPSo; EDNA FROEDER ARCURI, CNPGL.pt_BR
Aparece nas coleções:Resumo em anais de congresso (CNPSO)

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