Title:	Avaliação da viabilidade e espressão de proteínas heterólogas em linhagens recombinantes de Komagataella Phaffii X-33.
Authors:	ALVES, L. M. RODRIGUES, K. B. FAVARO, L. C. de L. QUIRINO, B. F. NORONHA, E. F.
Affiliation:	LETÍCIA MORESCHI ALVES; KELLY BARRETO RODRIGUES; LEIA CECILIA DE LIMA FAVARO, CNPAE; BETANIA FERRAZ QUIRINO, CNPAE; ELIANE FERREIRA NORONHA.
Date Issued:	2026
Citation:	In: SIMPÓSIO DE BIOLOGIA MICROBIANA, 5., 2025, Brasília, DF. Anais... Brasília, DF: Universidade de Brasília, 2026.
Description:	O presente trabalho tem como objetivo caracterizar linhagens recombinantes de Komagataella phaffii X-33 expressando expansinas e mono-oxigenases líticas de polissacarídeos (LPMOs), visando à sua futura aplicação em coquetéis enzimáticos voltados à nutrição animal. Foram realizadas a reativação, a preservação e a avaliação da expressão proteica das linhagens recombinantes. 21 linhagens que estavam preservadas por nove anos em ultracongelamento a –80 °C foram reativadas, e suas viabilidades foram confirmadas em meio YPD suplementado com zeocina (100 µg/mL). Todas apresentaram crescimento satisfatório e ausência de contaminação, evidenciando a eficiência do método de conservação e a manutenção da estabilidade genética após longo período de armazenamento. O estoque de trabalho foi refeito a partir de cultivos líquidos adicionados de glicerol 60% como crioprotetor e armazenados novamente em ultrafreezer. Onze essas 21 linhagens foram avaliadas quanto à produção das proteínas heterólogas, os cultivos foram realizados em meio indutivo (BMGY/BMMY) contendo metanol a 2%, conforme protocolo descrito no EasySelect™ Pichia Expression Kit Manual. Após a indução, o sobrenadante foi coletado, concentrado aproximadamente seis vezes em um Amicon® Stirred Cells com membrana de 5 KDa e submetido à análise por SDSPAGE. Os resultados demonstraram que três das linhagens avaliadas produtoras de LPMOs de Trichoderma reesei, Colletotrichum graminicola e Botryobasidium botryosum e quatro linhagens produtoras de expansinas do Saccharum complex, apresentaram expressão satisfatória das proteínas-alvo, todas essas transformadas com o vetor pPICZB. Os géis revelaram bandas bem definidas nas amostras concentradas, confirmando a expressão das proteínas recombinantes.
Thesagro:	Enzima Genética Nutrição Animal
Type of Material:	Resumo em anais e proceedings
Access:	openAccess
Appears in Collections:	Resumo em anais de congresso (CNPAE)