Título:	Expression of grapevine leafroll-associated virus 3 coat protein gene in Escherichia coli and production of polyclonal antibodies.
Autoria:	FAJARDO, T. V. M. BARROS, D. R. NICKEL, O. KUHN, G. ZERBINI, M.
Afiliação:	THOR VINICIUS MARTINS FAJARDO, CNPUV; Danielle R. Barros, UFV; OSMAR NICKEL, CNPUV; GILBERTO KUHN, CPACT; Murilo Zerbini, UFV.
Ano de publicação:	2007
Referência:	Fitopatologia Brasileira, Brasília, v. 32, n. 6, p. 496-500, 2007.
Conteúdo:	Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), the main viral species ofthe grapevine leafroll complex, causes yield and quality reduction in grapes (Vitis spp.). The coat protein gene was RT-PCR-amplified from total RNA extracted from infected grapevine leaves and the amplified fragment was cloned and completely sequenced. The fragment was subsequently subcloned into the pRSET-C expression vector. The recombinant plasmid was used to transform Escherichia coli BL21 :DE3 and express the capsid protein. The coat protein, fused to a 6 His-tag, was purified by affinity chromatography using an Ni-NTA resin. The identity ofthe purified protein was confirmed by SDS-PAGE and Westem blot. The in vitro-expressed protein was quantified and used for rabbit immunizations. The antiserum was shown to be sensitive and specific for the detection ofGLRaV-3 in grapevine extracts in Westem blot and DAS-ELISA assays, with no unspecific or heterologous reactions against other non-serologically related viruses being observed. Additional keywords: grapevine, GLRaV-3, recombinant protein, serology, antibodies. Expressão da proteína capsidial do Grapevine leafroll-associated virus 3 em Escherichia coli e produção de anticorpos policlonais Grapevine leafroll-associated virus 3 (GLRaV-3), a principal espécie viral do complexo do enrolamento da folha da videira tViüs spp.), causa reduções no rendimento e na qualidade da uva. O gene da proteína capsidial foi amplificado via RTPCR a partir de RNA total, extraído de folhas de videira infectadas. O fragmento amplificado foi clonado e completamente seqüenciado. Em seguida, o fragmento foi subclonado no vetor de expressão pRSET-C. O plasmídeo recombinante foi utilizado para a expressão da proteina capsidial em Escherichia co/i BL21:DE3. A proteína capsidial, ligada a uma cauda de 6-His, foi purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDSPAGE e Wesfern blot e, após quantificação, foi utilizada para imunizar coelhos. O anti-soro mostrou-se sensível e específico para a detecção do GLRaV-3 em extratos de videira por Wesfern blot e DAS-ELISA, não tendo sido observadas reações inespecíficas ou heterólogas contra outros vírus sorologicamente não relacionados. Palavras-chave adicionais: videira, GLRaV-3, proteína recombinante, sorologia, anticorpos.
Thesagro:	Anticorpo Doença de Planta Uva Vírus Viticultura
NAL Thesaurus:	Grapevine leafroll-associated virus 3
Palavras-chave:	Enrolamento da folha da videira Proteína recombinante Sorologia
Tipo do material:	Artigo de periódico
Acesso:	openAccess
Aparece nas coleções:	Artigo em periódico indexado (CNPUV)