Title:	Clonagem e expressão heteróloga do gene pgk de Brucella abortus.
Authors:	CAITANO, M. A. B. JANK, C. C. SANTOS, L. R. dos SOARES, C. O. ROSINHA, G. M. S.
Affiliation:	MARRIELEN APARECIDA BENITES CAITANO, UNIVERSIDADE PARA O DESENVOLVIMENTO DO ESTADO E DA REGIÃO DO PANTANAL CARINA CALIXTO JANK, UNIVERSIDADE FEDERAL DE MATO GROSSO DO SUL LENITA RAMIRES DOS SANTOS, CNPGC CLEBER OLIVEIRA SOARES, CNPGC GRACIA MARIA SOARES ROSINHA, CNPGC.
Date Issued:	2013
Citation:	Bio(in)formação, v. 6, n. 6, 2013.
Pages:	p. 249-266
Description:	A brucelose é uma das doenças emergentes mais importantes mundialmente na atualidade, afetando diversas espécies animais e o homem. A situação brasileira no controle de doenças infecciosas de animais requer melhorias para atingir os padrões internacionais e aumentar a produção. Por estes motivos o MAPA vem incentivado o desenvolvimento de novas vacinas e formas de diagnósticos para a brucelose bovina. Enzimas metabólicas têm sido descritas no envolvimento da virulência de Brucella abortus. Uma delas é a fosfoglicerato cinase (PGK), codificada pelo gene pgk. Neste trabalho objetivou-se a produção da proteína recombinante PGK (PGKr) de B. abortus em sistema heterólogo de expressão, para caracterização da cepa vacinal geneticamente modificada, B. abortus 2308 p r 8 pgk por western blot e posterior utilização em testes sorológicos. Para isto, foi realizada a extração de DNA genômico da cepa S2308 de B. abortus e o gene pgk foi amplificado pela Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) a partir de primers específicos. O produto da PCR foi ligado ao plasmídeo pMAL-c2E. O clone recombinante, foi submetido à indução da produção da proteína em Escherichia coli. A PGKr foi purificada por cromatografia de afinidade e duas frações purificadas foram dosadas por Bradford, obtendo-se 2,62 mg da PGKr. Camundongos BALB/c foram injetados com a proteína emulsionada em adjuvante Montanide, via subcutânea. Foram realizadas três inoculações com intervalos de três semanas. Quinze dias após as inoculações, os soros sanguíneos destes animais foram coletados e separados para avaliação pelo método de Western Blot. Os soros confirmaram a produção de anticorpos contra o antígeno e pode-se observar que no ensaio com a cepa selvagem o anticorpo reagiu mostrando que a produção da proteína PGK está intacta nesta cepa e com a cepa mutante S2308 08 pgk o anticorpo não reagiu, mostrando que a produção da proteína PGK é nula, confirmando realmente a deleção do gene pgk nesta cepa.
Thesagro:	Brucelose Bovino Clonagem
NAL Thesaurus:	Brucellaceae
Keywords:	Fosfoglicerato cinase
Type of Material:	Artigo de periódico
Access:	openAccess
Appears in Collections:	Artigo em periódico indexado (CNPGC)