Título:	Produção de antissoro policlonal utilizando a proteína capsidial recombinante do Rupestris stem pitting-associated virus.
Autoria:	BASSO, M. F. FAJARDO, T. V. M. EIRAS, M. AYUB, R. A. NICKEL, O.
Afiliação:	MARCOS FERNANDO BASSO, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA; THOR VINICIUS MARTINS FAJARDO, CNPUV; MARCELOS EIRAS, INSTITUTO BIOLÓGICO; RICARDO ANTÔNIO AYUB, UNIVERSIDADE ESTADUAL DE PONTA GROSSA; OSMAR NICKEL, CNPUV.
Ano de publicação:	2010
Referência:	Ciência Rural, Santa Maria, v. 40, n. 11, p. 2385-2388, 2010.
Conteúdo:	O Rupestris stem pitting-associated virus (RSPaV) é o agente causal das caneluras do lenho da videira. Este trabalho teve como objetivo produzir antissoro policlonal a partir da proteína capsidial (CP) recombinante do RSPaV e avaliar a sua especificidade e sensibilidade. O gene da CP do RSPaV, com 780pb, foi previamente caracterizado. Esse gene foi subclonado no sítio de restrição EcoRI, no vetor de expressão pRSET-B e o plasmídeo recombinante foi utilizado para induzir a expressão da CP em Escherichia coli. A CP, ligada a uma cauda de seis histidinas, foi purificada por meio de cromatografia de afinidade em coluna de Ni-NTA a partir do extrato de proteínas totais extraídas de E. coli. A identidade da proteína purificada foi confirmada em SDS-PAGE e Western blot, utilizando-se anticorpos comerciais contra a cauda de seis histidinas. A CP recombinante expressada in vitro apresentou massa molecular de cerca de 31kDa. A proteína purificada foi quantificada e 2,55mg foram utilizados para a imunização de um coelho. O antissoro policlonal obtido reagiu com diferentes isolados deste vírus, extraídos de videiras em ELISA indireto.
Thesagro:	Viticultura Uva Doença de planta Vírus
Palavras-chave:	Detecção RSPaV Canelura do lenho Sorologia Limpeza clonal
Digital Object Identifier:	10.1590/S0103-84782010001100022
Notas:	Nota técnica.
Tipo do material:	Artigo de periódico
Acesso:	openAccess
Aparece nas coleções:	Nota Técnica/Nota científica (CNPUV)