Título:	Refinamento de parâmetros para produção de dsRNA em Escherichia coli (HT-115).
Autoria:	SOUZA, L. G. S. SOUZA NETO, E. R. DE BISPO, A. S. DA R. SILVA, P. H. DA ANDRADE, E. C. de
Afiliação:	LUIS GUSTAVO SALES SOUZA, CENTRO UNIVERSITÁRIO MARIA MILZA; EDVANDO RIBEIRO DE SOUZA NETO, CENTRO UNIVERSITÁRIO MARIA MILZA; ALINE SIMÕES DA ROCHA BISPO; PAULO HENRIQUE DA SILVA; EDUARDO CHUMBINHO DE ANDRADE, CNPMF.
Ano de publicação:	2025
Referência:	In: JORNADA CIENTÍFICA EMBRAPA MANDIOCA E FRUTICULTURA, 18., 2024. Inovação para a sustentabilidade agrícola. Cruz das Almas: Embrapa Mandioca e Fruticultura, 2025. p. 108. (Embrapa Mandioca e Fruticultura. Eventos Técnicos & Científicos, 003).
Conteúdo:	A produção de dsRNA em Escherichia coli (HT-115) foi realizada em meios de cultura LB (Lauril Broth) e TB (Terrific Broth), com e sem suplementação de sais minerais, contendo ampicilina a 100 mg.mL-1. O processo fermentativo de produção foi conduzido a 37 °C e 250 rpm e o crescimento bacteriano foi verificado em espectrofotômetro até atingir DO600nm de 0,4. Após esse período, a suspensão bacteriana foi induzida com IPTG (Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside) a uma concentração final de 0,4 mM ou Lactose 1 mM e mantida em agitação até atingir DO600nm de 1,0, momento em que a bactéria foi coletada por centrifugação a 9000 rpm por 5 minutos. Em seguida, os pellets bacterianos foram ressuspendidos em 800 µL de SDS 0,1% em tampão PBS 1X e fervidos por dois minutos e o dsRNA extraído utilizando protocolo com Trizol, de acordo com as recomendações do fabricante. Após a extração, as amostras foram submetidas ao tratamento com DNase e S1nuclease, a partir do protocolo do kit TURBO™ DNAse (Thermo), a fim de garantir que as amostras continham apenas RNA de fita dupla, que é o alvo da quantificação. Posteriormente, as amostras não tratadas e tratadas foram quantificadas em espectrofotômetro Nanodrop e os dsRNAs extraídos foram analisados por eletroforese em gel de agarose 1,5% para avaliar sua integridade. Após obtenção destes resultados, foi elaborado um planejamento fatorial utilizando um Delineamento Composto Central Rotacional (DCCR) com duas variáveis (concentração dos indutores e suplementação com MgCl2 + solução de elementos traços (SET)) gerando 12 ensaios para otimização do processo de produção. Todo experimento foi conduzido em duplicata e para análise estatística foi utilizado programa “Statistic 7.0®”. [...].
Thesagro:	Praga Genética Molecular Escherichia Coli
NAL Thesaurus:	Molecular genetics Plant pests
Tipo do material:	Resumo em anais e proceedings
Acesso:	openAccess
Aparece nas coleções:	Resumo em anais de congresso (CNPMF)